[发明专利]在重组毕赤酵母中表达假黑盘菌素成熟多肽的方法有效
申请号: | 201010149914.6 | 申请日: | 2010-04-16 |
公开(公告)号: | CN101845454A | 公开(公告)日: | 2010-09-29 |
发明(设计)人: | 刘德虎 | 申请(专利权)人: | 刘德虎 |
主分类号: | C12N15/81 | 分类号: | C12N15/81;C12N15/31;C12N1/19;C07K14/37;C07K1/16;C12R1/84 |
代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人: | 王朋飞;王加岭 |
地址: | 100081 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明提供了一种在毕赤酵母细胞中以组成型方式表达和生产假黑盘菌素成熟多肽重组蛋白的方法,其包括:1)优化假黑盘菌素成熟多肽基因;2)采用分子克隆等方法得到毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子DNA序列,将假黑盘菌素成熟多肽基因置于甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子调控之下,与质粒连接得到新的、组成型和分泌型的毕赤酵母高效表达载体;3)利用该载体转化毕赤酵母,获得的重组毕赤酵母菌株产生具有生物活性的假黑盘菌素成熟多肽;4)对该工程菌株高密度发酵条件以及重组蛋白的表达和纯化进行优化。采用本发明方法制备得到的假黑盘菌素成熟多肽可应用于医疗、食品、饲料及科研等领域,适于规模化生产假黑盘菌素蛋白。 | ||
搜索关键词: | 重组 酵母 表达 盘菌 成熟 多肽 方法 | ||
【主权项】:
一种含有编码假黑盘菌素成熟多肽的DNA序列的表达载体,其包括酵母组成型启动子,位于启动子下游的编码α-因子分泌信号肽的核苷酸序列以及编码假黑盘菌素成熟多肽的DNA序列,所述编码假黑盘菌素成熟多肽的DNA序列的5’端具有酵母Kex2基因表达产物切割识别序列GAGAAAAGA。
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- 2016-05-25 - 2019-07-09 - C12N15/81
- 本发明涉及基因工程技术领域,尤其是涉及一种可提高酿酒酵母乙醇产率的重组质粒pY16TEF1‑△SPT15‑125及其应用。本发明一种重组质粒pY16TEF1‑△SPT15‑125,所述的重组质粒pY16TEF1‑△SPT15‑125中的△SPT15‑125是SPT15基因经过突变后获得,△SPT15‑125碱基序列为SEQ ID No.2,其所翻译的转录因子spt15p的氨基酸序列为SEQ ID No.3;所述的序列SEQ ID No.2中发生突变的碱基分别为39a>g,128 a>g,156a>g、163a>g、247a>g、653a>g;所述的序列SEQ ID No.3中发生突变的氨基酸分别为Glu43Gly,Lys55Glu,Lys83 Glu,Lys218Arg;所述的携带重组质粒pY16TEF1‑△SPT15‑125的酿酒酵母在提高乙醇产率中的应用。本发明可提高酿酒酵母乙醇产率。
- 一种体外蛋白合成体系、试剂盒及其制备方法-201711452033.X
- 郭敏;徐开;陈鉴冰;周子鉴;柴智;章小铃;王海鹏;于雪 - 康码(上海)生物科技有限公司
- 2017-12-28 - 2019-07-05 - C12N15/81
- 本发明提供了一种体外蛋白合成体系、试剂盒及其制备方法,具体地,本发明由特定比例的(a)细胞提取物;和(b)第一反应促进剂混合所形成的无细胞的体外蛋白合成体系可显著提高外源蛋白的合成效率。
- 一种毕赤酵母中异源表达内切葡聚糖酶EGⅡ,EGⅣ,EGⅤ的构建方法-201910230812.8
- 钟成;舒月力;李栋梁 - 天津科技大学
- 2019-03-26 - 2019-07-05 - C12N15/81
- 本发明的目的在于构建一种异源表达EGⅡ,EGⅣ,EGⅤ蛋白的重组毕赤酵母,具体步骤如:(1)里氏木霉RNA和CDNA的获得:固体诱导培养基获得菌丝体,试剂盒提取总RNA和cDNA;(2)目的基因的克隆:用合理引物PCR扩增出目的基因;(3)构建表达载体:以Ppic9k为载体,将目的基因插入启动子AOX1下游,5'和3'端酶切位点分别为EcoRⅠ,NotⅠ;(4)获取重组菌株:以bglⅠ为表达载体的线性化位点,实现表达载体线性化,电转,得到重组酵母;(5)重组菌株的诱导产酶:摇瓶发酵,用适当甲醇诱导产酶;(6)重组蛋白活性检测:利用SDS‑PAGE及刚果红‑CMC检测重组蛋白的表达量及活性。本方法构建的重组菌株能高效表达带his标签的蛋白,能得到高效单酶组分。
- 用于高通量酵母双杂交技术的重组载体及其大规模筛选互作蛋白的方法-201610436290.3
- 曹罡;杨芳;周美玲;雷莹莹;姚琪利;韩以超;朱成航;伍享;戴金霞;宋云峰;陈西;曾思华;傅振芳 - 华中农业大学
- 2016-06-17 - 2019-07-05 - C12N15/81
- 本发明公开了一种用于酵母双杂交的相关重组载体及其利用高通量测序技术大规模筛选互作蛋白的酵母双杂交的方法,该方法依赖于一种整合酶Integrase phiC31(En)的特有整合功能,通过对传统酵母双杂交载体的改造,使其与高通量测序技术有机结合,实现成百上千的Bait蛋白同时对Prey蛋白文库的筛选工作。将整合酶及其特异识别的核苷酸序列插入Matchmaker GAL4系统的载体中,通过酵母双杂交的方法使重组载体进入同一个酵母细胞,整合酶发生作用,将其特异识别的核苷酸序列及其紧邻的核苷酸序列进行特异性定向重排,从而使得两个重组载体融合成一个融合载体,此时猎物和诱饵蛋白序列被定向连接成融合载体上的一段新的序列,通过扩增、高通量测序,从而经济高效地筛选相互作用蛋白质并构建全面的蛋白互作网络图谱。
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