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[发明专利]一种基于BcAgo的核酸切割体系及靶标核酸分子检测体系-CN202211297582.5在审
发明人： 徐志南;方蒙君;司振军;黄迪 -专利权人：杭州孚斯泰生物技术有限公司
申请日： 2022-10-22 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：本发明提供了一种基于BcAgo的核酸切割体系及靶标核酸分子的检测体系。切割体系包含BcAgo、向导核酸分子以及核酸探针，通过对向导核酸分子的设计，可实现在核酸探针的特定位点进行切割。检测体系包含BcAgo蛋白、向导核酸、待检靶标核酸分子以及核酸探针。该检测体系工作温度更温和，适合核酸检测操作，并可识别单碱基突变，可以高活性、高特异性地快速、准确检测病原微生物、基因突变和特异靶标核酸。
一种基于 bcago 核酸切割体系靶标分子检测

[发明专利]一种基于TthAgo的核酸切割体系及靶标核酸分子的检测方法和试剂盒-CN202111257837.0在审
发明人： 徐志南;方蒙君;黄迪 -专利权人：杭州孚斯泰生物技术有限公司
申请日： 2021-10-27 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：本发明提供了一种基于TthAgo的核酸切割体系及靶标核酸分子的检测方法和试剂盒，靶标核酸分子的检测方法包括向含有待检靶标核酸分子的反应体系中加入Ago蛋白、向导DNA、核酸探针，反应完成后对其进行检测。该方法可用于快速检测病原微生物、基因突变和特异靶标DNA等。
一种基于 tthago 核酸切割体系靶标分子检测方法试剂盒

[发明专利]一种基于TbAgo的核酸切割体系及靶标核酸分子的检测方法和试剂盒-CN202111255982.5在审
发明人： 徐志南;方蒙君;黄迪 -专利权人：杭州孚斯泰生物技术有限公司
申请日： 2021-10-27 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12N9/16 文献下载
摘要：本发明提供了一种基于TbAgo的核酸切割体系及靶标核酸分子的检测方法和试剂盒，靶标核酸分子的检测方法包括向含有待检靶标核酸分子的反应体系中加入Ago蛋白、向导DNA、核酸探针，反应完成后对其进行检测。该方法可用于快速检测病原微生物、基因突变和特异靶标DNA等。
一种基于 tbago 核酸切割体系靶标分子检测方法试剂盒

[发明专利]一种促进生物素合成的方法、促进生物素合成的重组细胞和基因工程菌-CN201910585879.3有效
发明人： 徐志南;朱勇刚;周斌;肖峰 -专利权人：浙江圣达生物药业股份有限公司
申请日： 2019-07-01 - 公布日： 2022-09-30 - 主分类号： C12P17/18 文献下载
摘要：本发明公开了一种促进生物素合成的方法，促进生物素合成的重组细胞和基因工程菌，该方法通过引入枯草芽孢杆菌168(Bacillus subtilis 168)来源的编码庚二酸辅酶A合成酶基因bioW和能够裂解长链脂肪酰基‑ACP的P450氧化酶基因bioI来强化生物素前体庚二酸硫酯的供应，促进下游生物素合成基因bioAFDB对生物素的合成。通过本发明，获得的工程菌生物素合成能力得到了极大的提升，在添加少量庚二酸的情况下，上罐分批发酵产生了80mg/L生物素，其产量是野生型易变假单胞菌的8000倍。
一种促进生物素合成方法重组细胞基因工程

[发明专利]一种基于葡萄糖信号的便携式核酸检测方法-CN202110102222.4在审
发明人： 徐志南;黄迪;石朱伟;方蒙君 -专利权人：浙江大学
申请日： 2021-01-26 - 公布日： 2022-07-26 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种基于葡萄糖信号的便携式核酸检测方法。该设计借助化学偶联的方式，利用ssDNA将产糖酶修饰至磁珠上，从而制备功能化磁珠传感器。具体检测流程包括：(1)借助等温扩增技术对核酸检测片段进行扩增；(2)通过CRISPR/Cas12a体系对扩增片段进行识别，利用其核酸酶活性释放功能化磁珠上的产葡萄糖酶类；(3)通过磁分离，游离的酶催化底物水解形成葡萄糖。(4)借助便携式血糖仪可对葡萄糖浓度进行测定，实现对于核酸的定量检测。该方法操作便携，无需大型仪器辅助，成本低廉，且选择性好、灵敏度高，具有一定的应用前景。
一种基于葡萄糖信号便携式核酸检测方法

[发明专利]CRISPR/Cas12a体系可视化半定量检测转基因作物NOS终止子的方法-CN202011007681.6有效
发明人： 徐志南;黄迪;石朱伟 -专利权人：浙江大学
申请日： 2020-09-23 - 公布日： 2022-07-26 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明提供了CRISPR/Cas12a体系可视化半定量检测转基因作物NOS终止子的方法，包括如下步骤：(1)借助RPA技术对NOS终止子中的检测片段进行扩增；(2)在crRNA的介导下，Cas12a可特异性识别扩增产物，并激活核酸酶活性，从而释放借助ssDNA偶联于磁珠上的产葡萄糖酶类；(3)通过磁分离，游离的产糖酶催化形成葡萄糖，并在葡萄糖氧化酶作用下生成过氧化氢。(4)借助Fenton反应，产生·OH自由基刻蚀金纳米棒，呈现不同的颜色。而借助便携式仪器可测量其吸收峰波长，实现对于NOS终止子的半定量检测。该方法操作便携，无需大型仪器辅助，成本低廉，且选择性好、灵敏度高，具有一定的应用前景。
crispr cas12a 体系可视化定量检测转基因作物 nos 终止方法

[发明专利]一种提高D-生物素产量的生产方法-CN202210011841.7在审
发明人：郭凤柱;李飞龙;周斌;梅吉雷;李光进;况嘉铀;江根强;朱勇刚;徐志南;赵佳润 -专利权人：浙江圣达生物药业股份有限公司;浙江新银象生物工程有限公司
申请日： 2022-01-06 - 公布日： 2022-05-13 - 主分类号： C12P17/18 文献下载
摘要：本发明涉及一种提高D‑生物素产量的生产方法，属于生物技术领域。本发明公开了一种提高D‑生物素产量的生产方法，该方法是采用易变假单胞菌(Pseudomonas mutabilis)基因工程菌，以葡萄糖和甘油为复合碳源，并采用两阶段或三阶段控温策略，结合乙醇补料工艺进行D‑生物素的快速发酵生产，较原始工艺产量提高了21％‑170％，周期缩短了13％‑28％。本发明提供了一种简便、安全、高效的D‑生物素发酵生产方法，改变了已有生产工艺步骤，显著提高了D‑生物素的生产强度，不仅缩短了发酵周期，节约了成本，而且减少了发酵废液和废气的排放，减轻环境污染，另外，工艺简单易放大，易于实现工业化生产。
一种提高生物素产量生产方法

[发明专利]一种用于预防和治疗炎症性肠病的绿色健康药物-CN202210077996.0在审
发明人：杨忠连;徐慧珍;侯美容;邢小雪;徐志南;李雪艳;柳丛美 -专利权人：安徽理工大学
申请日： 2022-01-24 - 公布日： 2022-05-13 - 主分类号： A61K36/9064 文献下载
摘要：本发明属于医药技术领域，公开了一种用于预防和治疗炎症性肠病的绿色健康药物，用于预防和治疗炎症性肠病的绿色健康药物按照质量份数由黄芪30‑35份、砂仁20‑25份、白芍10‑15份、白术10‑15份、金针菇10‑15份、广藿香5‑8份、车前草种5‑8份、雷公藤5‑8份、以及长双歧杆菌1‑2份组成。本发明利用中草药结合益生菌进行炎症性肠病的防治，不仅成本低，同时安全性高；本发明能够有利于预防因职业问题导致的肠病，同时能够调节肠道菌群平衡、增强肠豁膜屏障功能、调节肠豁膜免疫，能够高效、彻底的预防、治疗炎症性肠病。
一种用于预防治疗炎症性肠病绿色健康药物

[发明专利]基于距离信号输出的靶核酸即时检测方法-CN202111359300.5在审
发明人： 徐志南;黄迪 -专利权人：杭州孚斯泰生物技术有限公司
申请日： 2021-11-17 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明提供了一种基于距离信号输出的靶核酸即时检测方法，具体包含一种CRISPR Cas12响应的DNA智能水凝胶和基于距离信号输出的纸基微流控芯片。反应流程包括：(1)对待测样品中的总核酸进行提取；(2)借助等温扩增技术对核酸检测片段进行扩增；(3)通过CRISPR Cas12a体系对扩增片段进行识别，利用其核酸酶活性对DNA智能水凝胶进行切割，并释放其中包埋的信号分子；(4)借助纸基微流控芯片上的级联酶反应对信号进行转导，最终借助芯片上色柱的距离信号进行检测结果的读取。该方法操作便携，无需大型仪器辅助，成本低廉，且保持了传统CRISPR Cas12体系选择性好、灵敏度高的优点，具有应用前景。
基于距离信号输出核酸即时检测方法

[发明专利]一种利用CRISPR/Cas12a体系可视化检测金黄色葡萄球菌的方法-CN202110816762.9在审
发明人： 徐志南;钱佳婕;黄迪;方蒙君 -专利权人：浙江大学
申请日： 2021-07-20 - 公布日： 2021-11-19 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用CRISPR/Cas12a体系可视化检测金黄色葡萄球菌的方法，包括如下步骤：(1)借助RAA技术对金黄色葡萄球菌nuc基因和16S rDNA分别进行扩增；(2)在crRNA的介导下，Cas12a可特异性识别扩增产物，并激活核酸酶活性，从而切割两端修饰有FAM和Biotin的ssDNA，形成FAM‑ssDNA片段与Biotin‑ssDNA片段；(3)FAM‑ssDNA片段与胶体金试纸条结合垫上的抗FAM抗体结合，由于毛细作用向前泳动；(4)Biotin‑ssDNA片段在质控线上被链霉亲和素捕获，抗FAM抗体与FAM‑ssDNA片段的复合物在检测线上被抗IgG捕获，由于胶体金的聚集使检测线呈现红色，由此实现对于金黄色葡萄球菌的检测。该方法操作简单便携，不依赖大型仪器设备，成本低廉，且灵敏度高、特异性强，具有一定的应用前景。
一种利用 crispr cas12a 体系可视化检测金黄色葡萄球菌方法

[发明专利]基于CRISPR技术改造酿酒酵母利用DL-蛋氨酸合成S-腺苷蛋氨酸的方法-CN201910717181.2在审
发明人： 徐志南;刘伟;连佳长;黄磊 -专利权人：浙江大学
申请日： 2019-08-05 - 公布日： 2021-02-05 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于CRISPR技术改造酿酒酵母利用DL‑蛋氨酸合成S‑腺苷蛋氨酸的方法及应用：在二倍体工业酿酒酵母中构建了一种基于CRISPR/Cas9技术的基因敲入，基因敲除和Delta位点整合等基因组改造方法；进一步的利用该方法对该酵母菌株HPA3基因位点敲入DAAO与L‑PheDH表达框，SAH1基因位点敲入DAAO与L‑PheDH表达框，SPE2基因位点敲入SAM2基因表达框，GLC3基因位点敲入SAM2基因表达框，获得的工程菌利用DL‑蛋氨酸合成S‑腺苷蛋氨酸的能力得到显著提高。
基于 crispr 技术改造酿酒酵母利用 dl 蛋氨酸合成腺苷方法

[发明专利]一种构建高产谷胱甘肽重组菌株的方法及应用-CN201910680780.1在审
发明人： 徐志南;刘伟;黄磊;连佳长;蔡谨 -专利权人：浙江大学
申请日： 2019-07-26 - 公布日： 2021-02-02 - 主分类号： C12N15/77 文献下载
摘要：一种构建高产谷胱甘肽重组菌株的方法与应用，属于生物工程领域。本发明提供的高产谷胱甘肽的重组菌株方法的特征在于：以自身大量合成谷氨酸的谷氨酸棒杆菌为出发菌株，引入来源无乳链球菌的gshF基因或来源大肠杆菌的gshA和gshB基因赋予谷胱甘肽合成能力；进一步基因组缺失基因aceD，mcbR和sdaA；同时表达截短的serA基因，pgk基因，来源大肠杆菌的cysE基因和cysK基因，来源拟南芥的cysE基因，强化半胱氨酸途径；鉴于谷氨酸棒杆菌株自身可以合成大量谷氨酸，半胱氨酸途径已被强化，获得的工程菌发酵过程中仅需添加甘氨酸即可高产谷胱甘肽。
一种构建高产谷胱甘肽重组菌株方法应用

[发明专利]促进生物素合成的方法、促进生物素合成的重组细胞和基因工程菌-CN201910591872.2在审
发明人： 徐志南;朱勇刚;周斌;肖峰 -专利权人：浙江圣达生物药业股份有限公司
申请日： 2019-07-01 - 公布日： 2021-01-05 - 主分类号： C12N15/78 文献下载
摘要：本发明公开了一种促进生物素合成的方法、促进生物素合成的重组细胞和基因工程菌，该方法将枯草芽孢杆菌168(Bacillus subtilis 168)生物素合成操纵子bioWAFDBI中各个生物素合成基因bioW、bioA、bioF、bioD、bioB和bioI单独克隆并重新进行排列组合，其中，基因bioF、bioA、bioD和bioB可以来自其他含有相应基因的微生物。通过强启动子过表达上述重排的生物素合成基因簇，包含这些顺序的载体能够转化到其他微生物中，尤其是易变假单胞菌。通过本发明，获得的工程菌生物素合成能力得到了极大的提升，在添加庚二酸的情况下，上罐补料分批发酵产生了272mg/L生物素，其产量是野生型易变假单胞菌的27200倍。
促进生物素合成方法重组细胞基因工程

[发明专利]一种利用L-谷氨酸氧化酶催化生产α-酮戊二酸的方法-CN201510851671.3有效
发明人： 徐志南;唐云平;沈颂娣;朱晓仙;黄保苗;王鹏 -专利权人：浙江汇宁生物科技有限公司
申请日： 2015-11-30 - 公布日： 2020-06-19 - 主分类号： C12N15/53 文献下载
摘要：本发明公开一种利用L‑谷氨酸氧化酶催化生产α‑酮戊二酸的方法，包括以下步骤：对L‑谷氨酸氧化酶（L‑GOX）基因的密码子进行优化设计和合成；构建L‑GOX和类弹性蛋白（ELP）的融合表达载体pET‑28a‑LGOX‑ELP并将其转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中，挑取转化子培养并添加诱导剂进行表达，获得重组L‑谷氨酸氧化酶融合蛋白粗酶液；利用ITC方法纯化获得重组L‑谷氨酸氧化酶融合蛋白，利用蛋白酶对重组L‑谷氨酸氧化酶融合蛋白进行酶切，获得成熟的L‑谷氨酸氧化酶；利用成熟的L‑谷氨酸氧化酶催化生产酮戊二酸。本发明方法简单、快速、高效，可用于大规模的分离纯化L‑谷氨酸氧化酶，在酮戊二酸的酶法生产中具有较高的实际应用价值。
一种利用谷氨酸氧化酶催化生产酮戊二酸方法

[发明专利]25-羟基维生素D3-CN201911131411.3在审
发明人： 徐志南;朱勇刚;周斌;汤丹丹;刘伟;黄磊 -专利权人：浙江圣达生物药业股份有限公司
申请日： 2019-11-19 - 公布日： 2020-04-24 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及25‑羟基维生素D3生产菌株及其筛选方法与应用，属于生物工程技术领域。所述25‑羟基维生素D3生产菌株的保藏编号为：CCTCC M 2019385，保藏日期为：2019年5月23日。上述菌株可应用于高效转化底物维生素D3合成25‑羟基维生素D3。经本发明筛选出的菌株转化维生素D3效率高，易培养，易于工业化放大。
25 羟基维生素 base sub

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