[发明专利]多糖粘液形成菌的靶基因缺失

摘要

鞘氨醇单胞菌菌株具有牢固附着于细胞表面的细胞外多糖(即吉兰糖胶、丢坦糖胶)。所述附着可通过破坏营养素摄入细胞或由于细胞表面多糖生物合成的限制位点而限制多糖产生。多糖生物合成的两种基因——产生吉兰糖胶的菌株中的gelM和gelN以及产生丢坦糖胶的菌株中的dpsM和dpsN，已经通过缺失突变而被灭活，并显示产生非牢固附着于细胞表面的多糖，即粘液形式。多糖生物合成的另一种基因——产生吉兰糖胶的菌株中的gelI，通过插入突变而被灭活，并也显示产生粘液表型。产生丢坦糖胶的菌株中的同源性基因dpsI也与多糖至细胞表面的附着有关。粘液特征通过细胞被离心的能力和在显微镜下或在稀释的悬浮液中没有可见的细胞凝集而证明。丢坦糖胶粘液突变体的繁殖力稍增加，且回收的丢坦糖胶产物具有显著改进的流变学性质。吉兰糖胶粘液突变体的发酵液粘度较低，这便于在发酵过程中混合，然而，回收的吉兰糖胶产物的凝胶强度较由荚膜菌株产生的吉兰糖胶的凝胶强度低。gelR基因的缺失，所述gelR基因编码与表面蛋白和外膜蛋白具有同源性以及与带有多糖的蛋白质具有弱同源性的蛋白质。

主权项

1. 一种制备鞘氨醇单胞菌属细菌的方法，所述鞘氨醇单胞菌属细菌含有选自鞘氨醇胶多糖生物合成基因簇的M和N基因的一种基因或两种基因的突变，所述方法包括：分离鞘氨醇单胞菌属的第一种细菌的基因组DNA片段，其中所述片段含有鞘氨醇胶多糖生物合成基因簇的M和/或N基因的全部或部分；诱导所述片段突变以形成突变的片段；将所述突变的片段导入鞘氨醇单胞菌属的第二种细菌，其中所述第二种细菌含有鞘氨醇胶多糖生物合成基因簇的野生型基因M和/或N；分离所述第二种细菌的子代，其中所述突变的片段已经整合入基因组并置换所述第二种细菌的鞘氨醇胶多糖生物合成基因簇的野生型基因M和/或N。