本申请涉及一种核酸组合物、目标微生物检测试剂盒及其应用，核酸组合物，包括目标微生物的核酸扩增引物，目标微生物包括扣囊复膜酵母、横梗霉和黄曲霉中的至少一种；其中，扣囊复膜酵母的核酸扩增引物包括如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示序列的引物对；横梗霉的核酸扩增引物包括如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示序列的引物对；黄曲霉的核酸扩增引物包括如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示序列的引物对。本申请的核酸组合物能够用于对各个制曲阶段的大曲样本中的目标微生物进行定量分析，进而区分整优曲和整次曲，从而实现快速、客观地检测各个制曲阶段的大曲质量。
本发明提供了一种用于DNAMarker制备的紧凑型质粒的构建方法，该构建方法为：在参考质粒P1中的筛选标记基因S1内找到或引入一个目标限制性内切酶X的切点Q1，在不改变筛选标记基因S1对应蛋白序列和复制起始点序列Ori的前提下，以Q1为锚定点，引入更多限制性内切酶X识别位点，设计出目标质粒P2序列；以P2序列为蓝本，通过化学合成及扩增拼接方法获得目标质粒P2，即紧凑型质粒pM4850。本发明还提供了所述质粒的应用，该质粒长度4850bp，核苷酸序列为SEQ ID NO：5，包含36个限制性内切酶BamHI切点，单酶切可获得12种特征片段，大小依次为700bp、600bp、500bp、400bp、300bp、250bp、200bp、150bp、100bp、75bp、50bp和25bp，各片段的相对质量比为7:6:5:4:3:2.5:6:3:3:3:3:3，可作为小片段DNAMarker应用于科学研究和生物技术领域。
