本发明属于人血清白蛋白的生产领域，具体涉及一种人血清白蛋白的生产方法、核苷酸序列、表达载体及表达系统。该核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的核苷酸序列，根据CHO细胞密码子偏爱性，对人血清白蛋白基因进行密码子优化，能够提高目的基因的基础表达量。另外，本发明进一步采用无血清中低温培养，添加小分子添加物在CHO细胞系高效表达人血清白蛋白。
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及翻译增强元件在促进重组蛋白表达方面的应用、表达盒、载体、表达系统、试剂盒。本发明通过对人基因组翻译调控元件5'‑UTR插入序列进行构效关系分析，筛选设计出如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列作为翻译调控元件，紧邻连接在目的蛋白编码基因上游，构建重组蛋白表达载体，转染至哺乳动物细胞，进行重组蛋白表达，提高重组表达量，尤其是瞬时表达量。本发明通过试验验证，相比缺少翻译调控元件的表达系统，插入本发明提供的调控元件的表达系统，目的蛋白的瞬时表达量提高约1.5~2.0倍。
本发明提供了一种CHO细胞来源的外泌体miRNA在调控重组蛋白表达中的应用，本发明属于生物医药技术领域。本发明提供的一种CHO细胞来源的外泌体miRNA在调控重组蛋白表达中的应用中所述miRNA为cgr‑miR‑92a‑3p，核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明发现转染miRNA inhibitor下调CHO细胞来源的外泌体miR‑92a‑3p水平，阿达木抗体(重组蛋白)的表达水平显著升高，有望提供一种提高CHO细胞重组蛋白表达的新方法。
本发明涉及一种瞬时转染试剂及其应用，属于细胞生物学和生物技术领域。本发明的瞬时转染试剂，包括聚乙烯亚胺盐酸盐溶液、氯化钠溶液和氯化镁溶液；聚乙烯亚胺盐酸盐溶液的浓度为0.8～1.2mg/mL，pH为6.9～7.1，聚乙烯亚胺盐酸盐为PEI MAX 40K；氯化钠溶液的浓度为4.8～5.3mol/L；氯化镁溶液的浓度为0.8～1.2mol/L。本发明的瞬时转染试剂用于细胞转染时，具有较高的转染效率。由于聚乙烯亚胺盐酸盐的浓度较低，本发明的瞬时转染试剂具有较低的毒性。本发明的瞬时转染试剂是一种价廉、毒性小、转染效率高的瞬时转染试剂，可用于重组蛋白生产和基因治疗等方面。
