本发明属于基因工程技术领域,具体涉及翻译增强元件在促进重组蛋白表达方面的应用、表达盒、载体、表达系统、试剂盒。本发明通过对人基因组翻译调控元件5'‑UTR插入序列进行构效关系分析,筛选设计出如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列作为翻译调控元件,紧邻连接在目的蛋白编码基因上游,构建重组蛋白表达载体,转染至哺乳动物细胞,进行重组蛋白表达,提高重组表达量,尤其是瞬时表达量。本发明通过试验验证,相比缺少翻译调控元件的表达系统,插入本发明提供的调控元件的表达系统,目的蛋白的瞬时表达量提高约1.5~2.0倍。
本发明提供了一种CHO细胞来源的外泌体miRNA在调控重组蛋白表达中的应用,本发明属于生物医药技术领域。本发明提供的一种CHO细胞来源的外泌体miRNA在调控重组蛋白表达中的应用中所述miRNA为cgr‑miR‑92a‑3p,核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明发现转染miRNA inhibitor下调CHO细胞来源的外泌体miR‑92a‑3p水平,阿达木抗体(重组蛋白)的表达水平显著升高,有望提供一种提高CHO细胞重组蛋白表达的新方法。
本发明涉及一种瞬时转染试剂及其应用,属于细胞生物学和生物技术领域。本发明的瞬时转染试剂,包括聚乙烯亚胺盐酸盐溶液、氯化钠溶液和氯化镁溶液;聚乙烯亚胺盐酸盐溶液的浓度为0.8~1.2mg/mL,pH为6.9~7.1,聚乙烯亚胺盐酸盐为PEI MAX 40K;氯化钠溶液的浓度为4.8~5.3mol/L;氯化镁溶液的浓度为0.8~1.2mol/L。本发明的瞬时转染试剂用于细胞转染时,具有较高的转染效率。由于聚乙烯亚胺盐酸盐的浓度较低,本发明的瞬时转染试剂具有较低的毒性。本发明的瞬时转染试剂是一种价廉、毒性小、转染效率高的瞬时转染试剂,可用于重组蛋白生产和基因治疗等方面。