本发明涉及生物技术领域,具体涉及热稳定和比活提高的植酸酶ECAPPA突变体及其基因和应用,氨基酸序列如SEQ ID NO.1的植酸酶的第74,82,97,159,179,376,389,402位氨基酸被突变。相对于原始植酸酶ECAPPA的21%的保留率,突变后植酸酶在80℃处理5分钟,酶活保留率提高到34%‑89%。
本发明涉及生物技术领域,具体涉及比活提高的植酸酶APPA突变体及其基因和应用。本发明采用定点饱和突变的方法对氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的大肠杆菌植酸酶APPA的第53位、第68位、第77位、第96位、第112位、第202位、第233位、第247位和第362位进行分子改造,结合高通量筛选方法获得一系列比活提高的植酸酶突变体,突变体的比活均优于原始酶。
本发明涉及基因工程技术领域,具体涉及一种噬菌体与宿主共生的进化淀粉酶的方法及应用。所述方法以野生型SP‑amyC作为噬菌体,将AV1质粒、诱变质粒AEMP共转化携带F因子的大肠杆菌得到宿主菌,在以淀粉为唯一碳源的M9培养基中生长;AV1质粒辅助表达gVI蛋白,核酸序列如SEQ ID No.2所示;诱变质粒AEMP核酸序列如SEQ ID No.3所示;野生型SP‑amyC核酸序列如SEQ ID No.4所示。当噬菌体SP‑amyC侵染大肠杆菌后,噬菌体上的淀粉酶基因表达淀粉酶,淀粉酶水解软琼脂上的唯一碳源淀粉产生小分子麦芽寡糖为大肠杆菌提供生长所需能量,新产生的子代大肠杆菌又继续被子代噬菌体继续侵染,以此循环共生。相对传统进化方法,本发明更加高效便捷,不用建库及大量的人工筛选,成本低廉,人为干预极少。
本发明提供一种木聚糖酶突变体,该木聚糖酶突变体是基于亲本瘤胃真菌Neocallimastix patriciarum的木聚糖酶(xynCDBFV)基因(Genebank:KP691331.1)进行突变,相对于氨基酸序列SEQ ID NO:1所示的亲本木聚糖酶进行取代所得。本发明的木聚糖酶突变体与SEQ ID NO:1所示的亲本木聚糖酶相比,其耐酸稳定性和低pH比酶活有了显著的提升,有利于该酶的工业化应用。
本发明公开了一种漆酶及其基因和应用,属于基因工程技术领域。本发明的漆酶基因是经过对色齿毛菌Cerrena unicolor漆酶基因进行密码子优化后所得,核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供的漆酶基因通过转化黑曲霉重组表达,可在工业上实现大规模生产高酶活的漆酶,摇瓶培养最高酶活达到39U/ml,在7L发酵罐培养125h后,漆酶总酶活达9234U/ml。同时,本发明提供的漆酶与介体丁香酸甲酯对玉米赤霉烯酮有显著的破坏效果,有利于粮食运输和储备。
本发明涉及基因工程领域,具体涉及提高比活的α‑淀粉酶BasAmy突变体及其编码基因和应用。所述突变位点为:氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的α‑淀粉酶BasAmy发生以下突变:L29A,L269F,S270P,A275Y,Q278S,S279Q,D356G和L412C。本发明获得的突变体的比活较原酶提高。
本发明涉及基因工程领域,具体涉及提高比活的α‑淀粉酶BasAmy突变体及其编码基因和应用。所述突变位点为:氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的α‑淀粉酶BasAmy发生以下突变:L29A,A112R,L269F,K274S,A275Y,Q278S,S279Q和L412C。本发明获得的突变体的比活较原酶提高。