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[发明专利]一种基于构建ATP再生系统高效催化合成PAPS的方法-CN202011069179.8有效
发明人：康振;堵国成;王阳;胥睿睿;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-09-30 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12P19/40 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于构建ATP再生系统高效催化合成PAPS的方法，属于生物工程技术领域。通过微生物重组表达人工构建PAPS合成双功能酶，实现了PAPS的高效率生产。在此基础上，耦联了谷氨酸棒杆菌和结核分枝杆菌来源的聚磷酸激酶的ATP再生系统，可同时回收两种副产物焦磷酸和ADP，实现底物与产物的等量转化，催化体系中生成的PAPS具有较高的纯度，能实现大部分磺酸转移反应中磺酸基团的供给。
一种基于构建 atp 再生系统高效催化合成 paps 方法

[发明专利]一种强化表达内质网大小调节因子的酿酒酵母菌株的构建和应用-CN202110757496.7有效
发明人：刘龙;陈坚;吕雪芹;堵国成;李江华;刘延峰;金柯;于文文 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-07-05 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种强化表达内质网大小调节因子的酿酒酵母菌株的构建和应用，属于代谢工程技术领域。本发明以酿酒酵母BY4741为出发菌株，强化MVA代谢途径中的关键基因tHMG1(3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶)、IDI(异戊烯基焦磷酸异构酶)以及ERG20(法尼基焦磷酸合酶)以提高角鲨烯前体代谢物产量，敲除ROX1基因以促进菌体生长，发酵生产角鲨烯产量为1.44g/L。进一步强化内质网大小调节因子相关基因INO2、SCS22、TCB2和IST2以扩大内质网表面积增强细胞蛋白质合成能力，发酵产量达到2.06g/L，提高了43.1％。
一种强化表达内质网大小调节因子酿酒酵母菌株构建应用

[发明专利]一种基于构建双功能酶合成PAPS的方法-CN202011069389.7有效
发明人：康振;王阳;胥睿睿;堵国成;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2020-09-30 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12P19/32 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于构建双功能酶合成PAPS的方法，属于生物技术领域。本发明首先对不同来源的ATP硫酸化酶和APS激酶进行优选，利用蛋白质融合技术，将优选所得的ATP硫酸化酶和APS激酶之间融合一段不同的蛋白接头(linker)，构建了双功能PAPS合酶。进一步对linker进行理性设计和改造，大大提高了转化效率，并简化了酶催化剂的获取，减少酶催化剂在制备过程中的损失。使得ATP转化率提高了25％，催化时间缩短59％。此外通过突变ATP硫酸化酶P环HRAH序列为HNGH和HAGH，进一步提高其酶活，使得PAPS的转化率可达48％。
一种基于构建功能合成 paps 方法

[发明专利]一种产肝素前体的重组大肠杆菌及其应用-CN202110392140.8有效
发明人：康振;王阳;胡珊;堵国成;陈坚 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-04-10 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种产肝素前体的重组大肠杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明首先在大肠杆菌EcN(Escherichia coli Nissle 1917)中筛选异源表达UDP‑N‑乙酰葡萄糖胺和UDP‑葡萄糖醛酸途径基因glmS、glmM和glmU以及galU和ugd，通过途径基因组合，过表达EcN来源肝素前体合酶基因，摇瓶水平达到1.29g/L，发酵罐优化肝素前体产量达到15g/L。
一种肝素重组大肠杆菌及其应用

[发明专利]一种生产硫酸软骨素裂解酶ABCI的食品级安全酵母菌及其应用-CN202111039895.6有效
发明人：康振;金学荣;陈坚;堵国成;李江华 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-09-06 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种生产硫酸软骨素裂解酶ABCI的食品级安全酵母菌及其应用，属于生物工程技术领域。本方法经过食品级安全菌株毕赤酵母异源整合表达了硫酸软骨素裂解酶ABCI，可实现胞内和胞外两种生产模式，且培养过程无需添加任何抗生素。通过对于启动子的筛选，得到了能够有效提高硫酸软骨素裂解酶ABCI酶活表达量的启动子，使得重组毕赤酵母在发酵罐条件下，分泌表达酶活可达到2840U/L，为食品级微生物高效生产制备硫酸软骨素裂解酶奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。
一种生产硫酸软骨素裂解 abci 食品级安全酵母菌及其应用

[发明专利]发酵生产肝素的酵母工程菌的构建及其应用-CN202111062175.1有效
发明人：康振;陈坚;张永淋;堵国成;李江华;王阳;张腾;王璟;孟俊东;汤传根 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-09-10 - 公布日： 2023-04-28 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了发酵生产肝素的酵母工程菌的构建及其应用，属于生物工程技术领域。本发明首先将肝素合成途径中的外源基因肝素前体合酶基因kfiC，α4‑N‑乙酰氨基葡糖转移酶酶基因kfiA和UDP‑葡萄糖脱氢酶编码基因tuaD分别整合到毕赤酵母和酿酒酵母基因组中，初步构建了肝素前体合成途径，之后分别在毕赤酵母和酿酒酵母中表达筛选并优化N‑脱乙酰磺酸转移酶、葡萄糖醛酸C5‑变构酶、磺酸乙酰肝素2‑磺酸转移酶、磺酸乙酰肝素6‑磺酸转移酶、磺酸乙酰肝素3‑磺酸转移酶，得到合成不同磺酸化程度的磺酸乙酰肝素的生产菌株。本发明首次实现了利用微生物发酵碳源合成不同磺酸化程度的肝素。
发酵生产肝素酵母工程构建及其应用

[发明专利]一种正交线性基因表达系统及其应用-CN202210909414.0在审
发明人：刘延峰;陈坚;堵国成;刘龙;李江华;吕雪芹;田荣臻 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-07-29 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明公开了一种正交线性基因表达系统及应用，属于基因工程领域。本发明是以苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)作为表达宿主，通过在胞内构建线性质粒，实现了基因的稳定表达。同时，本发明还实现了线性质粒拷贝数的精确控制。这不仅在苏云金芽孢杆菌内开发了一个稳定的蛋白表达系统，还为苏云金芽孢杆菌合成生物学应用奠定了基础。
一种正交线性基因表达系统及其应用

[发明专利]一种毕赤酵母及其构建方法与其在合成骨桥蛋白中的应用-CN202210957082.3在审
发明人：刘龙;陈坚;吕雪芹;堵国成;李江华;刘延峰;张智航;孙丹;杨淇圆 -专利权人：江南大学;白马未来食品研究院
申请日： 2022-08-10 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明涉及一种毕赤酵母及其构建方法与其在合成骨桥蛋白中的应用。本发明提供了骨桥蛋白表达系统，包括第一质粒和第二质粒；所述第一质粒上连接有编码骨桥蛋白的基因和分子信号肽，第二质粒上连接有编码分子伴侣蛋白的基因；所述骨桥蛋白表达系统用于毕赤酵母的构建，并以毕赤酵母X33为宿主，构建所得；所述分子伴侣蛋白选自PDI1基因、BIP基因、HAC1基因或ERO1基因中的一种或多种；所述信号肽选自α因子信号肽、OPN自身信号肽、INU1和MEL1中的一种或多种。本发明不仅能实现提高OPN表达量的目的，同时也提供了一种增加蛋白表达水平的方法。
一种酵母及其构建方法与其合成蛋白中的应用

[发明专利]一种枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备方法及转化方法-CN202210909397.0在审
发明人：刘延峰;陈坚;堵国成;刘龙;李江华;吕雪芹;赵润芝;田荣臻 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-07-29 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明涉及一种枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备方法及转化方法，属于基因工程技术领域。通过使用木糖诱导型启动子PxylA在基因组上过表达一个额外拷贝的comK基因获得一株转化效率提高的重组枯草芽孢杆菌，再通过对培养基种类、种子液培养时间、外源DNA添加用量、感受态中甘油添加量的优化，建立了一种高效、便捷的DNA转化方法。
一种枯草芽孢杆菌感受态细胞制备方法转化

[发明专利]一种胞外转运番茄红素的酿酒酵母菌株构建及其应用-CN202211004881.5在审
发明人：刘龙;陈坚;吕雪芹;堵国成;李江华;刘延峰;刘家恒 -专利权人：江南大学
申请日： 2022-08-22 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种胞外转运番茄红素的酿酒酵母菌株构建及其应用，属于发酵工程技术领域。本发明构建了一株强化番茄红素胞外分泌能力的重组酿酒酵母菌株，所述重组酿酒酵母强化表达了截短3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶、异戊烯基焦磷酸异构酶、法尼基焦磷酸合酶、内质网大小调节因子INO2、NADH激酶POS5和ABC转运蛋白Snq2；异源表达香叶基香叶基二磷酸合酶、八氢番茄红素脱氢酶、双功能番茄红素环化酶/八氢番茄红素合酶突变体CrtYBM1(W61R)；敲除酿酒酵母中的ROX1、EXG1和GAL80基因；并且回补乳清酸苷5'‑磷酸脱羧酶的表达；对其进行摇瓶发酵时，该菌株胞外番茄红素含量达到12.58mg/L，提高至出发菌株的16.5倍，因此具有广阔的应用前景。
一种外转番茄酿酒酵母菌株构建及其应用

[发明专利]一种无胶原蛋白水解活性的角蛋白酶突变体-CN202211539892.3在审
发明人：张娟;彭政;吉晓梅;陈坚;堵国成;李江华 -专利权人：嘉兴未来食品研究院
申请日： 2022-12-02 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N9/50 文献下载
摘要：本发明公开了一种无胶原蛋白水解活性的角蛋白酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明提供了一种无胶原蛋白水解活性的角蛋白酶突变体，所述突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的角蛋白酶的第221位的甲硫氨酸突变为异亮氨酸，命名为KerZ1/M221I。通过酶活测定结果显示，角蛋白酶突变体KerZ1/M221I保留了59235U/mL的角蛋白水解活性，并且无胶原蛋白水解活性，因此该角蛋白酶突变体在应用时可以避免胶原蛋白酶的损伤，提高皮革的品质。
一种胶原蛋白水解活性角蛋白突变体

[发明专利]提高氧化葡萄糖酸杆菌1,3-二羟基丙酮产量和生产强度的方法-CN202211208253.9在审
发明人：周景文;曾伟主;单小玉;刘立;李江华;陈坚;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2021-04-25 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了提高氧化葡萄糖酸杆菌1,3‑二羟基丙酮产量和生产强度的方法，属于发酵工程技术领域。本发明通过在氧化葡萄糖酸杆菌中敲除对1,3‑二羟基丙酮代谢通量有潜在影响的脱氢酶基因，增强其底物甘油转化成1,3‑二羟基丙酮的效率，从而来提高1,3‑二羟基丙酮的产量和生产强度。与对照菌株G.oxydansWSH‑003相比，重组菌株G.oxydans WSH‑1、G.oxydans WSH‑2、G.oxydans WSH‑3、G.oxydans WSH‑4、G.oxydans WSH‑5、G.oxydans WSH‑6、G.oxydans WSH‑7和G.oxydans WSH‑8的1,3‑二羟基丙酮产量、转化率和生产强度均显著得到提升。
提高氧化葡萄糖杆菌羟基丙酮产量生产强度方法

[发明专利]一种谷氨酸棒杆菌内源GlcNAc6P磷酸酶及提高GlcNAc产量的方法-CN202310111425.9在审
发明人：刘龙;陈坚;卢健行;吕雪芹;堵国成;卢伟;李江华;刘延峰;刘长峰;刘思奇;卢建功 -专利权人：山东润德生物科技有限公司;江南大学
申请日： 2023-02-14 - 公布日： 2023-04-14 - 主分类号： C12N9/80 文献下载
摘要：本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌内源GlcNAc6P磷酸酶及提高GlcNAc产量的方法，具体涉及采用重组谷氨酸棒杆菌进行发酵生产，该重组谷氨酸棒杆菌过表达了如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，该蛋白编码GlcNAc6P磷酸酶，能将GlcNAc6P去磷酸化为GlcNAc。本发明通过机器学习的方式鉴定了谷氨酸棒杆菌内源GlcNAc胞内转运蛋白以及内源GlcNAc6P磷酸酶的编码基因，并根据筛选结果对菌株进行改造，显著提高了GlcNAc的产量。
一种谷氨酸杆菌内源 glcnac6p 磷酸酶提高 glcnac 产量方法

[发明专利]一株在啤酒中存活率高的乳酸菌-CN202310134960.6在审
发明人：方芳;李佳莲;王涛;陈坚;堵国成 -专利权人：江南大学
申请日： 2023-02-17 - 公布日： 2023-04-14 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一株在啤酒中存活率高的乳酸菌，属于生物工程技术领域。本发明提供了一株在啤酒中存活率较高的乳酸片球菌ZQ8，将该菌株以活菌形式添加于啤酒中，可以减缓啤酒老化速度，提高啤酒的抗氧化能力，对于开发新的功能性啤酒具有重要意义。本发明还通过胁迫预处理菌体，提高乳酸片球菌ZQ8在啤酒环境中的存活率，可使37℃静置12h存活率较原始菌株最高能提升10倍，25℃静置24h存活率较原始菌株最高能提升2.8倍，4℃静置4w存活率较原始菌株最高能提升2.0倍。
啤酒存活率乳酸菌

[发明专利]一种强化乳铁蛋白表达的毕赤酵母及其构建方法与应用-CN202210946281.4在审
发明人：刘龙;陈坚;吕雪芹;堵国成;吴文扬;李江华;刘延峰;周国霖;崔世修 -专利权人：江南大学;内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司
申请日： 2022-08-08 - 公布日： 2023-04-14 - 主分类号： C07K14/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种强化乳铁蛋白表达的毕赤酵母及其构方法与应用。本发明首先筛选了常用的信号肽，然后将不同的信号肽进行整合，构建杂合型信号肽，使乳铁蛋白能够在细胞器中快速传递，促进乳铁蛋白的分泌。本发明通过不同信号肽之间的组合，能够有效的提高乳铁蛋白的表达量，并通过westernblot发现乳铁蛋白的表达量增加了约5倍，高达98mg/L。
一种强化铁蛋白表达酵母及其构建方法应用