本发明公开了耐热的I型普鲁兰酶的突变体酶，其氨基酸序列如SEQ ID No.1，或如SEQ ID No.2，或SEQ ID No.3，或SEQ ID No.4、或SEQ ID No.5所示。本发明还公开了编码突变体酶的基因，其如SEQ ID No.6，或SEQ ID No.7，或SEQ ID No.8，或SEQ ID No.9、或SEQ ID No.10。本发明还公开了突变体酶的制备方法，包括从普鲁兰酶的氨基酸序列选取突变位点，设计突变引物对；以携带普鲁兰酶基因的载体为模板，进行点突变反应，得到突变质粒；然后于转化工程菌中复制表达。本发明的突变体酶具有更优的耐热性能。
本发明公开了I型普鲁兰酶的突变体酶，突变体酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还公开了编码所述突变体酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明还公开了突变体酶的制备方法，包括根据I型普鲁兰酶的氨基酸序列进行同源建模，基于序列比对分析和蛋白结构分析，选取突变位点并设计对突变引物对；以携带I型普鲁兰酶基因的载体为模板，分别进行定点突变反应，得到突变质粒；于突变质粒转化工程菌中复制表达对应的突变体酶。本发明的突变体酶具有更优的耐热性能和比酶活。
本发明公开了一种CRISPR/LpCas9基因编辑系统及其应用，CRISPR/LpCas9基因编辑系统包括：LpCas9蛋白和sgRNA复合体，能精确定位靶向DNA序列，并产生切割，使DNA发生双链断裂损伤；所述LpCas9蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述sgRNA具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，或者基于SEQ ID NO:2改造的sgRNA序列。本发明能有效解决spCas9应用于副干酪乳杆菌上存在的异源密码子偏好性和细胞毒性的问题；通过导入人为设计的CRISPR RNA和修复模板在细胞中或体外进行基因编辑，有效解决了菌株因自身特性或携带代表质粒较大等原因所导致的转化效率过低的问题，同时其在基因编辑领域具有广阔的应用前景。
