本发明实施例公开了一种用于纯化凝血因子VII的方法包括:对凝血因子VII转基因兔的兔乳进行脱脂,得到脱脂兔乳;将所述脱脂兔乳经SP Fast Flow阳离子层析,获得含凝血因子VII的第一纯化液;将所述第一纯化液经Heparin Bestarose HP层析柱层析,得到含凝血因子VII的第二纯化液;将所述第二纯化液经Butyl‑650M层析得到含凝血因子VII的第三纯化液。本发明用于纯化凝血因子VII的方法,利用SP Fast Flow填料对凝血因子VII进行粗纯,以去除兔奶中大部分的杂蛋白,随后用Heparin Bestarose HP层析柱对SP Fast Flow洗脱样品进行纯化,最后用Butyl‑650M层析对Heparin Bestarose HP洗脱样品进行纯化,这样就减少了兔乳中大量的酪蛋白对亲和填料载量与纯化效果的影响,可有效提高凝血因子纯度,降低成本,提高经济效益。
本发明涉及一种在大肠杆菌分泌型表达重组人粒细胞集落因子(rHG-CSF),该载体通过在外源蛋白的N端添加DsbA信号肽(SEQ ID NO:1),并使用λPL启动子,可构建一种周质腔分泌型表达重组蛋白的载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,通过温度诱导实现外源蛋白在大肠杆菌周质腔中表达。该方法表达量高、分泌效率高,适用于高效稳定地分泌表达多种外源基因。