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[发明专利]一种利用八角种子诱导愈伤组织产生莽草酸的方法-CN202210484643.2在审
发明人：余兴华;李玉祥;杨艳梅;滕娟;孟凡来;余正祥;杨云;黄兴粉 -专利权人：文山壮族苗族自治州农业科学院
申请日： 2022-05-06 - 公布日： 2022-07-15 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用八角种子诱导愈伤组织产生莽草酸的方法，包括以下步骤：对八角种子进行处理，将处理好的八角种子接种于愈伤组织诱导的培养基中进行诱导培养，诱导产生愈伤组织；通过建立八角愈伤组织诱导技术体系、八角愈伤组织的继代培养以及建立悬浮细胞培养体系，可以对八角种子的愈伤组织进行完整的离体快繁，不仅实现了八角种子愈伤组织的诱导方法，而且还补充了从八角愈伤组织中产生莽草酸研究方法的空白，从而满足了莽草酸长期稳定的工业化生产，解决当前生产中存在的原料短缺问题，还能减少对八角果实产量的依赖性，通过愈伤组织或悬浮培养对于以获取植物代谢产物为目的的医药工业生产和化学工业生产而言具有特殊的重要意义。
一种利用八角种子诱导组织产生莽草方法

[发明专利]一种建立具有高体胚发生能力橡胶树胚性细胞纯系以及维持其胚性形态的方法-CN202210375641.X在审
发明人：戴雪梅;彭素娜;顾晓川;黄天带;成镜;李季;周权男 -专利权人：中国热带农业科学院橡胶研究所
申请日： 2022-04-11 - 公布日： 2022-07-08 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种建立具有高体胚发生能力橡胶树胚性细胞纯系以及维持其胚性形态的方法，涉及植物组织培养和细胞工程技术领域。具体包括以下步骤：诱导初代愈伤组织、获得胚性愈伤组织以及胚性愈伤组织低密度悬浮培养，即可建立高体胚发生能力的胚性细胞纯系。本发明还提供了维持胚性细胞纯系的继代保存方法和继代培养基。利用本发明提供的方法，可以将橡胶树易碎胚性愈伤组织的获得时间缩短至6个月以内，并且获得具有高达100％体胚诱导率的胚性细胞纯系；利用本发明提供的继代培养基进行继代培养，胚性细胞纯系在继代培养2年后仍可维持60％左右的体胚发生能力，为橡胶树基因转化、基因编辑和原生质体培养与融合提供良好且状态较一致的材料来源。
一种建立具有高体胚发生能力橡胶树细胞以及维持形态方法

[发明专利]一种利用生物反应装置的人参干细胞分离培养方法-CN202110424378.4有效
发明人：张明臣;刘冰;闫培生;高秀君 -专利权人：山东安然纳米实业发展有限公司
申请日： 2021-04-20 - 公布日： 2022-07-08 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用生物反应装置的人参干细胞分离培养方法，包括：(1)采用一步法制备人参不定根；(2)将步骤(1)制得的人参不定根取根尖部分，解剖分离获取干细胞区域；(3)将步骤(2)经分离获取的干细胞接种至干细胞诱导培养基中暗培养，获得干细胞团，再将所述干细胞团转入继代培养基中暗培养；(4)将步骤(3)继代培养的人参干细胞接种至干细胞液体培养基摇瓶中，以100‑140rpm的条件避光培养；(5)将步骤(4)摇瓶培养后的人参干细胞接种至生物反应装置中，避光培养，获得人参干细胞。采用本发明的液体培养基和培养方法，能够直接通过成熟人参的各个部分诱导产生不定根，在简化诱导步骤、缩短诱导时间的同时提高不定根中人参皂苷的含量，最终获取指标良好的人参干细胞。
一种利用生物反应装置人参干细胞分离培养方法

[发明专利]一种利用生物反应装置的人参干细胞分离培养方法-CN202110424379.9有效
发明人：闫培生;张明臣;高秀君;刘冰 -专利权人：山东安然纳米实业发展有限公司
申请日： 2021-04-20 - 公布日： 2022-07-08 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用生物反应装置的人参干细胞分离培养方法，包括：(1)采用一步法制备人参不定根；(2)将步骤(1)制得的人参不定根取根尖部分，解剖分离获取干细胞区域；(3)将步骤(2)经分离获取的干细胞接种至干细胞诱导培养基中暗培养，获得干细胞团，再将所述干细胞团转入继代培养基中暗培养；(4)将步骤(3)继代培养的人参干细胞接种至干细胞液体培养基摇瓶中，以100‑140rpm的条件避光培养；(5)将步骤(4)摇瓶培养后的人参干细胞接种至生物反应装置中，避光培养，获得人参干细胞。采用本发明的液体培养基和培养方法，能够直接通过成熟人参的各个部分诱导产生不定根，在简化诱导步骤、缩短诱导时间的同时提高不定根中人参皂苷的含量，最终获取指标良好的人参干细胞。
一种利用生物反应装置人参干细胞分离培养方法

[发明专利]一种人参干细胞的分离培养方法-CN202110424852.3有效
发明人：刘冰;高秀君;闫培生;张明臣 -专利权人：山东安然纳米实业发展有限公司
申请日： 2021-04-20 - 公布日： 2022-07-08 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种人参干细胞的分离培养方法，包括：(1)采用一步法制备人参不定根；(2)将步骤(1)制得的人参不定根取根尖部分，解剖分离获取干细胞区域；(3)将步骤(2)经分离获取的干细胞接种至干细胞诱导培养基中暗培养，获得干细胞团，再将所述干细胞团转入继代培养基中暗培养；(4)将步骤(3)经继代培养的干细胞接种至干细胞液体培养基中，暗培养，获得人参干细胞。采用本发明的液体培养基和培养方法，能够直接通过成熟人参的各个部分诱导产生不定根，在简化诱导步骤、缩短诱导时间的同时提高不定根中人参皂苷的含量，最终获取指标良好的人参干细胞。
一种人参干细胞分离培养方法

[发明专利]一种石斛根尖植物干细胞的制备方法及其在降血糖方面的应用-CN202210217617.3在审
发明人：肖乐义;刘元柱;米明仁;杨勤英;李娟;刘晓;张腾业;刘新雨 -专利权人：青岛言鼎生物医疗科技有限公司
申请日： 2022-03-07 - 公布日： 2022-07-05 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种石斛根尖植物干细胞的制备方法及其在降血糖方面的应用。主要通过标本前处理、标本处理、诱导摇床培养、换液传代冻存及收获、干燥及粉碎等几个不同的步骤，得到石斛根尖植物干细胞粉末。然后得到的石斛植物干细胞粉末按照100mg/kg/d的剂量具有显著的降血糖的效果，可以用于预防或治疗糖尿病。
一种石斛根尖植物干细胞制备方法及其血糖方面应用

[发明专利]一种基于尺寸排阻法提取蓝莓及类似浆果外泌体样纳米颗粒的方法-CN202210354666.1在审
发明人：袁方;冷扬帆;朱航鑫;徐晓云;潘思轶 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2022-04-06 - 公布日： 2022-07-05 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于提取蓝莓及类似浆果外泌体样纳米颗粒技术领域，提出了一种基于尺寸排阻法提取蓝莓及类似浆果外泌体样纳米颗粒的方法，包括步骤1，将浆果与PBS按1:5稀释后榨汁，得到稀释的浆果汁；稀释后的浆果汁在4℃下经过三个连续的离心处理；步骤2，超滤浓缩，步骤3，使用qEV10分离柱处理浓缩样液，并进行浆果外泌体样液收集，步骤4，将qEV10分离柱收集的浆果外泌体样液在真空抽滤泵的作用下通过0.22um膜，在4℃下5000×g离心浓缩20min，收集浓缩的浆果外泌体样纳米颗粒；步骤5，粒径测量：采用纳米粒子颗粒跟踪分析仪对浆果外泌体样纳米颗粒的粒径进行分析。本发明操作简单，只需按要求收集相应组分的溶液，不会对ELNs产生损伤，得到的ELNs更为结构完整。
一种基于尺寸排阻法提取蓝莓类似浆果外泌体样纳米颗粒方法

[发明专利]一种不含易制爆化合物的植物培养基及其应用-CN202110241099.4有效
发明人：吴鸿;覃磊;杨跃生;宁熙平 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2021-03-04 - 公布日： 2022-07-05 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种不含易制爆化合物的植物培养基及其应用，属于植物生物技术领域。所述的不含易制爆化合物的植物培养基，包括如下含量的提供大量元素的化合物组分：3500～4200mg/L硝酸铵钙、1200～1600mg/L氯化钾、370mg/L七水硫酸镁和170mg/L磷酸二氢钾。根据植物对铵态氮的需求，可添加1000～1400mg/L氯化铵或1000～1400mg/L硫酸铵以补充铵态氮。本发明所述培养基和MS培养基相比，成分差别不大，但钙离子含量相对较高，有利于促进植物生长，组织培养效果良好，且不含易制爆化合物，成分稳定安全，不受管制，价格低廉，对组培产业有较大的应用价值。
一种不含易制爆化合物植物培养基及其应用

[发明专利]一种用于制备毛白杨叶片和/或根组织原生质体的组合物及其试剂和方法-CN202010993617.3有效
发明人：张德强;徐伟杰;谢剑波 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2020-09-21 - 公布日： 2022-07-01 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于制备毛白杨叶片和/或根组织原生质体的组合物及其试剂和方法，属于植物原生质体制备技术领域。本发明提供的用于制备毛白杨叶片和/或根组织原生质体的组合物，包括纤维素酶和浸解酶，所述纤维素酶的酶活为250～350U/g，所述浸解酶的酶活为700～900U/g，所述纤维素酶和浸解酶的质量比为(14.5～15.5):(3.5～4.5)。本发明通过纤维素酶和浸解酶组合使用对毛白杨叶片和/或根组织进行酶解，既保持了原生质体的高活性，且获得的原生质体的数量多，酶的价格又相对廉价，降低了成本，可以满足后续试验研究的要求。
一种用于制备毛白杨叶片组织原生质体组合及其试剂方法

[发明专利]一种阳春砂叶肉原生质体分离纯化的方法-CN201811353315.9有效
发明人：何国振;杨锐培;苏晓欣;李明晓;何卓航 -专利权人：广州中医药大学（广州中医药研究院）
申请日： 2018-11-14 - 公布日： 2022-07-01 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种阳春砂叶肉原生质体分离纯化的方法，包括材料的制备与预处理，采用酶解法进行原生质体的分离，采用沉降法与漂流法结合法纯化原生质体等步骤。本发明通过研究影响原生质体产量和活力的因素，如材料是否经过预处理、酶种类及浓度、酶解时间、渗透压调节剂浓度、不同纯化方法对叶肉细胞原生质体纯化效果的影响，优化了阳春砂叶肉原生质体分离纯化的实验条件，以获得高产和高活力的阳春砂原生质体，为阳春砂通过体细胞融合培育新品种奠定了基础。
一种阳春叶肉原生质体分离纯化方法

[发明专利]一种利用生物反应装置培养人参干细胞的方法-CN202110361867.X有效
发明人：刘冰;高秀君;闫培生;张明臣 -专利权人：山东安然纳米实业发展有限公司
申请日： 2021-04-02 - 公布日： 2022-06-28 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用生物反应装置培养人参干细胞的方法，包括以下步骤：(1)采用一步法培养人参不定根；(2)取人参不定根的根尖部分，置于渗透剂溶液中处理；(3)将处理后的人参不定根根尖部分先放入干细胞诱导培养基中培养，然后转入干细胞扩繁固体培养基中培养；(4)收集步骤(3)中得到的人参干细胞，接种到含有干细胞扩繁液体培养基的生物反应装置中，避光培养，获得人参干细胞。本发明获得了所需时间更短、步骤更简单的从成熟人参获得不定根，进而得到人参干细胞的方法，采用适宜的生物反应装置进行扩大培养，干细胞的增长倍数高，干细胞中有效成分含量高。
一种利用生物反应装置培养人参干细胞方法

[发明专利]一种培养人参干细胞的方法-CN202110424807.8有效
发明人：高秀君;刘冰;张明臣;闫培生 -专利权人：山东安然纳米实业发展有限公司
申请日： 2021-04-20 - 公布日： 2022-06-28 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种培养人参干细胞的方法，包括：(1)采用一步法制备人参不定根；(2)将步骤(1)制得的人参不定根取根尖部分，置于渗透剂溶液中处理；(3)将步骤(2)经渗透剂溶液处理的人参不定根根尖置于干细胞诱导培养基中培养，然后转入扩繁培养基中培养，获得人参干细胞；(4)将步骤(3)获得的人参干细胞转入干细胞液体培养基，暗培养获得人参干细胞。采用本发明的液体培养基和培养方法，能够直接通过成熟人参的各个部分诱导产生不定根，在简化诱导步骤、缩短诱导时间的同时提高不定根中人参皂苷的含量，最终获取指标良好的人参干细胞。
一种培养人参干细胞方法

[发明专利]一种绿萼梅原生质体分离的方法及其应用-CN202010378846.4有效
发明人：郑唐春;张启翔;李璐璐;卓孝康;袁存权;程堂仁;王佳 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2020-05-07 - 公布日： 2022-06-24 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种绿萼梅原生质体分离的方法及其应用，所述方法包括：选取绿萼梅枝条，剥皮后完全浸入酶解液中，在27～28℃温度酶解40～50min；酶解液包括：1.5～2.0％纤维素酶R‑10、0.75～1.0％离析酶R‑10、0.5M甘露醇、10mM KCl、20mM CaCl2、10mM MES、0.1％BSA和0.3％PVP，pH值为5.7～5.8。本发明将绿萼梅茎段木质部通过酶解进行原生质体分离，制备的原生质体产量大，活性高，产量最高为2.3×107个/g，活性达到93％以上。本发明制备得到的绿萼梅原生质体转化效率较高，在绿萼梅遗传转化和基因功能验证方面具备较大的应用价值。
一种绿萼梅原生质体分离方法及其应用

[发明专利]一种小立碗藓原生质体及其制备方法-CN202010638595.9有效
发明人：赵孟楷;李晓政;戴俊彪;胡章立 -专利权人：深圳大学
申请日： 2020-07-06 - 公布日： 2022-06-24 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种小立碗藓原生质体的制备方法，该方法包括以下步骤：S1.取小立碗藓茎叶体或原丝体，打成匀浆后放入BCDAT培养基中16h光照‑8h黑暗交替培养；S2.将混合酶溶解于6％～10％的甘露醇溶液中，涡旋混匀后离心，取上清过滤，得到混合酶溶液；S3.取步骤S1得到的原丝体放入步骤S2配制的混合酶溶液中混合均匀，酶解，过滤，离心去上清并用6％～10％的甘露醇溶液重悬，重复2～3次，得到的悬浮液即为小立碗藓原生质体；其中，步骤S2所述混合酶为纤维素酶、半纤维素酶或果胶酶中的任意两种或三种。该方法制备得到的原生质体的质量高、活性好，在保障原生质体的数量的前提下保证了再生效率，且制备方法简单、成本低，具有广泛的应用前景。
一种小立碗藓原生质体及其制备方法

[发明专利]一种从双子叶植物根及下胚轴中分离维管束的方法-CN202110055550.3有效
发明人：梁大成;吴辉艳;邓竹英;李冬怡 -专利权人：长江大学
申请日： 2021-01-15 - 公布日： 2022-06-24 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种从双子叶植物根及下胚轴中分离维管束的方法，所述方法包括：植株培养、固定、维管束剥离、纤维素酶和果胶酶消化以及用Triton X‑100剔除杂质污染。本发明通过在固定步骤中利用茶皂素协助维管束与邻近组织分离，然后用纤维素酶和果胶酶进行联合消化处理，有效去除了维管及邻近组织中的细胞壁、胞间残留物、纤维组织及膜样物质残留等，进一步利用Triton X‑100洗脱维管束周围组织，有效剔除膜样软组织的粘连污染，从而将维管束从根及下胚轴中分离出来，采用该方法分离得到的维管束，在显微镜下可观察到清晰的形态结构，无杂质影响，该方法简单快速易实施，分离效果好，可用于维管束形成和发育的研究。
一种双子叶植物胚轴分离维管束方法