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[发明专利]一种橡胶草叶绿体提取方法-CN202110367518.9在审
发明人：谢全亮;王旭初;李鸿彬 -专利权人：石河子大学
申请日： 2021-04-06 - 公布日： 2021-07-02 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种橡胶草叶片叶绿体提取的方法，包括采集橡胶草植物的完整叶片；将所述叶片组织破碎后进行初提得到橡胶草叶绿体粗提液；在细胞分离液的上层加入所述橡胶草叶绿体粗提液后在4℃，进行第一次超高速离心10‑15min；离心结束后在吸取所述细胞分离液的的沉淀，用叶绿体提取液清洗沉淀后进行第二次超高速离心12min，沉淀即可得完整橡胶草叶绿体。本发明可以应用于橡胶草叶绿体分离，还可以提取菊科或同属科植物的叶绿体，既适于从一般的植物材料收取，还可用于顽拗植物叶片的叶绿体分离。
一种橡胶草叶提取方法

[发明专利]一种利用配子体克隆系进行极北海带苗种培育的方法-CN201910811979.3有效
发明人：刘福利;袁艳敏;梁洲瑞;张朋艳;梁启迪 -专利权人：中国水产科学研究院黄海水产研究所
申请日： 2019-08-30 - 公布日： 2021-06-25 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用极北海带配子体进行苗种培育的方法，属于海水藻类养殖领域，其步骤为：取极北海带雌、雄配子体混合后打碎，用500目数的筛绢过滤后得到所需长度的配子体细胞段，用培养皿培养，培养条件为温度13℃，光照强度10μmol photons/(m2·s)，光周期8L:16D，培养液为添加F/2培养基的灭菌海水，培养过程中每3d更换一次培养液；从采苗到1cm需要40‑50d；1cm以后即可出库。本发明能够利用极北海带配子体得到极北海带小苗，抑制育苗过程中的单性生殖率。
一种利用配子体克隆进行北海苗种培育方法

[发明专利]莪术组培快繁培养基-CN201810692846.4有效
发明人：黄欲晓;梁霞丽;韩彰桂;潘喜芳;杨红英;梁芳;江月平 -专利权人：钦州市农业科学研究所
申请日： 2018-06-29 - 公布日： 2021-06-22 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种莪术组培快繁培养基，包括初代培养基，继代及生根培养基，其中初代培养基的配方为：硝酸钾5‑15mg/L、一水硝酸钙5‑15mg/L、七水硫酸亚铁5‑15mg/L、硝酸铵3‑8mg/L、无水硫酸镁3‑8mg/L、磷酸二氢钾3‑8mg/L、6‑BA 10‑20mg/L、NAA1‑3mg/L、葡萄糖25‑35mg/L、琼脂3‑6mg/L；继代及生根培养基的配方为：MS+2,4‑D 1‑2mg/L+KT 0.2‑0.5mg/L。本发明所述培养基能够在较短时间内培育得到大量的莪术种苗。
莪术组培快繁培养基

[发明专利]一种棉花下胚轴单细胞的分离方法-CN202110469528.3在审
发明人：金双侠;张献龙;朱相潜;覃元;许忠平 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2021-04-28 - 公布日： 2021-06-18 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及分子生物技术领域，且公开了一种棉花下胚轴单细胞的分离方法。该棉花下胚轴单细胞的分离方法，基于棉花叶片、愈伤组织、根的原生质体分离技术，对酶促体系进行优化改进，构建了适用于棉花下胚轴单细胞分离的实验体系，利用该方法可得到高质量，数量多的下胚轴单细胞，愈伤组织原生质体酶解方法中，酶解后的原生质体用W5solution重悬，本发明中用PBS+0.04％BSA进行重悬，效果较好，酶解时间只需4‑6小时，两次离心之后过40μm过滤筛，可以得到分散完整的下胚轴单细胞。
一种棉花胚轴单细胞分离方法

[发明专利]一种高纯度积雪草外泌体的提取方法-CN202110281985.X在审
发明人：王晓冰;周梓浩;郑钧杰 -专利权人：温州医科大学附属第一医院
申请日： 2021-03-16 - 公布日： 2021-06-18 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种高纯度积雪草外泌体的提取方法，涉及生物技术领域；所述方法具体为：积雪草叶在高速搅拌机中均化，净过滤后收集汁液；所述汁液以1000‑10000xg离心3‑5次后收集上清液，将颗粒物沉淀以100000xg的速度离心，得到外泌体；所述外泌体在蔗糖密度梯度中纯化后以100000xg的速度离心；本发明合理提高了提取的积雪草外泌体纯度，较好的保护了积雪草外泌体的生物学活性，更好的避免了杂蛋白的污染。与传统的单种超高速离心法相比，超高速离心法和蔗糖密度梯度离心相结合的方法提取的外泌体纯度更佳，避免了磁珠吸附了其他杂蛋白的缺陷，本发明提取的高纯度积雪草外泌体更有利于后续的应用。
一种纯度积雪草外泌体提取方法

[发明专利]一种诱导马铃薯生成试管薯的液体培养基、培养方法及应用-CN201910880053.X有效
发明人：刘璇;巩檑;宋玉霞;张丽;聂峰杰;甘晓燕;杨文静 -专利权人：宁夏农林科学院农业生物技术研究中心（宁夏农业生物技术重点实验室）
申请日： 2019-09-18 - 公布日： 2021-06-18 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种诱导马铃薯生成试管薯的液体培养基、培养方法及应用，属于马铃薯试管薯诱导技术领域。本发明所述液体培养基以MS为基本培养基，还包括蔗糖和植物激素；所述植物激素包括组合激素或单一激素。本发明所述液体培养基可以有效地提高马铃薯试管薯的大薯率、大薯平均重量和单株最终产量，利于脱毒微型薯的开发和应用；同时还可以缩短初始结薯天数和快速增长天数，试管苗茎段自转接之日起，在固体培养基生长10～15d后，转移至液体培养基黑暗条件下诱导试管薯，经过3～5天后，即可发生微型薯，并进入快速增长时期。
一种诱导马铃薯生成试管液体培养基培养方法应用

[发明专利]浮萍细胞的快速悬浮培养和高效遗传转化方法-CN201910962227.7有效
发明人：赵海;方扬;靳艳玲;黄非;杨贵利;杜安平;何开泽 -专利权人：中国科学院成都生物研究所
申请日： 2019-10-11 - 公布日： 2021-06-18 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种浮萍细胞的快速悬浮培养方法，包括(1)浮萍叶状体的预培养，(2)浮萍愈伤组织的诱导培养，(3)浮萍愈伤组织的继代培养，以及(4)浮萍细胞的悬浮培养这几个步骤，本发明还提供了一种浮萍悬浮细胞的高效遗传转化方法，以前述悬浮培养方法得到的浮萍细胞作为转化材料，利用质粒转化的农杆菌菌株对转化材料进行侵染，然后筛选培养，对筛选培养得到的细胞进行再生诱导培养，对再生诱导培养得到的叶状体进行扩大培养，得到转基因浮萍株系。本发明解决了现有技术尚未建立浮萍悬浮细胞遗传转化体系的问题，能在短时间快速获得大量的浮萍悬浮培养细胞，能高效转化浮萍细胞，获得稳定转基因浮萍株系。
浮萍细胞快速悬浮培养高效遗传转化方法

[发明专利]一种日本结缕草原生质体及其制备与转化方法-CN202110215248.X在审
发明人：滕珂;管瑾;范希峰;武菊英;韩朝;岳跃森;尹淑霞 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2021-02-25 - 公布日： 2021-06-15 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于植物原生质体制备及应用领域，具体涉及一种日本结缕草原生质体及其制备与转化方法。本发明优化了日本结缕草原生质体的制备方法，解决了原有技术中原生质体制备耗时较长，方法复杂，制备效率低的问题，不仅整个制备过程中无复杂操作，而且可以大量获得高质量、高活性的日本结缕草原生质体，以满足后续转化，每10‑20个幼嫩叶片即可得到106个原生质体，且原生质体活力高达98％。同时，本发明还首次建立了高效、稳定的日本结缕草原生质体的转化方法，多次试验重复结果表明，本发明原生质体的转化率可达60％以上，为日本结缕草基因功能的研究提供了强力支撑。
一种日本草原质体及其制备转化方法

[发明专利]地黄属地黄维管束形成层来源的地黄干细胞及制备和培养方法-CN201711291265.1有效
发明人：周鹏飞;李海华;刘友才;张伟;闫思涵;谢永生;张毅敏;史世强 -专利权人：新乡医学院
申请日： 2017-12-08 - 公布日： 2021-06-15 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种来源于玄参科地黄属地黄维管束形成层干细胞的制备和离体培养方法，其制备和培养方法如下：将新鲜地黄茎去除髓部后，切成小块组织，置于诱导培养基上诱导细胞生长；再转至分离培养基中培养，促使地黄形成层干细胞与脱分化细胞发生分层；将分层的细胞转移至生长培养基中培养后，再转移至继代培养基中连续培养，直至获得一种具有干细胞典型和多种优良特性的地黄形成层干细胞培养体系。本发明还公开上述地黄干细胞的培养方法，实现了离体地黄干细胞的长期稳定连续培养及扩大培养，为工业化大规模的离体培养地黄属茎形成层干细胞奠定基础，同时也为研究植物干细胞的生物学功能提供新的细胞来源。
地黄属地维管束形成层来源干细胞制备培养方法

[发明专利]一种植物愈伤组织功效滤液和外泌体提取方法-CN202110131924.5在审
发明人：李嘉伦 -专利权人：湖北嘉弘福科技有限责任公司
申请日： 2021-01-30 - 公布日： 2021-06-11 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种植物愈伤组织功效滤液和外泌体提取方法及应用。所述提取方法是将植物愈伤组织取方法具体是将植物愈伤组织加入hank’s液中匀浆过滤取滤液，经过多次不同离心调节下进行离心后，收集上层清液C即为植物愈伤组织功效滤液；将留在容器中的淡绿色或淡黄色胶装透明沉淀，加入PBS缓冲液或生理盐水将其溶解冻干得到淡黄色或淡绿色或白色干燥粉末即为植物愈伤组织外泌体。所述植物愈伤组织功效滤液和植物愈伤组织外泌体均用于皮肤创面愈合、皮肤保湿和延缓皮肤衰老中。本发明得到植物组织纯化外泌体产物性质稳定，可在常温下运输和储存，可以降低皮肤炎症反应，激活表皮再生，增强皮肤细胞增殖、分化能力，促进创面愈合，并抵抗和逆转光老化。
一种植物组织功效滤液外泌体提取方法

[发明专利]一种青兰属植物的组培快繁的培养基组及其应用-CN201911006770.6有效
发明人：秦小波 -专利权人：成都及禾生物科技有限公司
申请日： 2019-10-22 - 公布日： 2021-06-08 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及植物细胞诱导及组织培养技术领域，公开了一种青兰属植物的组培快繁的培养基组，包括诱导培养基、分化培养基和生根培养基，所述诱导培养基包括0.8～1.5MS培养基、6‑BA 0.5～1.0mg/L、IAA 0.1～0.3mg/L、2,4‑D 0.1～0.2mg/L、Vc 0.2～0.4mg/L、亚硝基铁氰化钠2.0～6.0mg/L、蔗糖25～30g/L和琼脂5～7g/L，pH＝5.6～6.2；所述分化培养基包括0.8～1.5MS培养基、6‑BA 0.5～1.0mg/L、NAA 0.05～0.1mg/L、IAA 0.05～0.1mg/L、蔗糖25～30g/L和琼脂5～7g/L，pH＝5.6～6.2；所述生根培养基包括0.5～1.0MS培养基、NAA 0.1～0.2mg/L、IBA 0～0.05mg/L、蔗糖15～25g/L、琼脂5～7g/L和马铃薯汁1.0～3.0mL/L；本发明还公开了该培养基组的应用，所述培养基组通过具有针对性的对多植物激素组合的培养基成分和配比的限定，达到了高效率繁育青兰属植物的栽培苗的效果。
一种青兰属植物组培快繁培养基及其应用

[发明专利]一种人参皂苷含量高的人参细胞培养方法-CN202110120858.1在审
发明人：侯丽丽;陈怀德;刘民宪;刘雨佳;凌远建 -专利权人：深圳先声科技发展有限公司
申请日： 2021-01-28 - 公布日： 2021-06-04 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及药用植物生物技术领域，具体公开了一种低成本、可大规模工业生产的人参皂苷含量高的人参细胞培养方法，包括人参细胞系诱导：对老山参消毒切片后超声波处理，置于培养基中培养；人参细胞系筛选：选择多种培养基并使用激素进行细胞分离培养，以筛选生长形态好、长势快的细胞系并进行固体继代和液体悬浮培养；转化条件优化：对筛选的细胞系进行酸处理，并控制转化温度以及转化时间，检测干燥产物中的人参皂苷Rg3和Rh2，并根据总和量确定最优转化条件；大规模工业化生产：根据最优转化条件，对筛选的细胞系进行液体悬浮培养并对培养规模梯级放大，以获得产量高、转化后人参皂苷含量高的规模化工业生产的人参细胞产物。
一种人参皂苷含量细胞培养方法

[发明专利]棉花外植体直接分化为胚性愈伤组织的方法及培养基-CN201810141299.0有效
发明人：李付广;王晔;张朝军;陈艳丽;葛晓阳;王倩华;杨召恩;王鹏 -专利权人：中国农业科学院棉花研究所
申请日： 2018-02-11 - 公布日： 2021-06-01 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种棉花外植体直接分化为胚性愈伤组织的方法及培养基。本发明所提供的棉花外植体直接分化为胚性愈伤组织的方法，包括如下步骤：将棉花外植体置于愈伤组织诱导培养基进行培养；所述愈伤组织诱导培养基中含有浓度为2.5mg/L的烯效唑。本发明通过在愈伤组织诱导培养基中添加一种烯效唑。能够使得外植体在45天左右得到胚性愈伤组织，从而跳过外植体到愈伤组织再到胚性愈伤组织这一漫长的过程，大大缩短了得到棉花胚胎干细胞的时间，提高了分化效率，实现了棉花组织的同步均一分化。本发明将在棉花的组织培养、基因功能验证及其品种改良中发挥重要作用。
棉花外植体直接化为胚性愈伤组织方法培养基

[发明专利]通过胚状体发生途径诱导三叶木通植株再生的培养基和方法-CN202010112599.3有效
发明人：张建;曹运梅;张欣然;赵振军;熊玉婷;郭丽红;李欣 -专利权人：长江大学
申请日： 2020-02-24 - 公布日： 2021-06-01 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种通过胚状体发生途径诱导三叶木通植株再生的培养基和方法，所述培养基包括诱导培养基、增殖培养基、成苗培养基；所述诱导培养基包括含有0.5mg/L～1.5mg/L 2,4‑D、0.5mg/L～1.5mg/L TDZ、500mg/L ME的MS培养基或含有0.5mg/L～1.5mg/L ZT、0.5mg/L～1.5mg/L NAA、500mg/L ME的WPM培养基；所述增殖培养基、成苗培养基均包括含有0.5mg/L～1.5mg/L 6‑BA的WPM培养基。通过本发明特质的培养基利用三叶木通果实幼胚通过胚状体发生途径进行组培成功诱导出苗。
通过胚状体发生途径诱导木通植株再生培养基方法

[发明专利]一种毛竹笋高活性线粒体的提取纯化及鉴定方法-CN201910707028.1有效
发明人：卢存福;王晓静;崔洪玮;耿新;杨颖;于婷乔;陈玉珍 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2019-08-01 - 公布日： 2021-06-01 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种毛竹笋高活性线粒体的提取纯化及鉴定方法。本发明提供了一种提取毛竹笋线粒体的方法，包括如下步骤：将毛竹笋依次进行匀浆、差速离心和蔗糖密度梯度离心，即得到纯化线粒体；所述差速离心采用离心力依次为1300‑1700g、5000‑7000g和12000‑15000g。本发明的方法对线粒体的损伤小，提取的线粒体活性高，对线粒体以外的细胞核组分、叶绿体或前质体组分、酚类和多糖等分离较为彻底，且从纯化的线粒体中可提取到高质量的线粒体RNA，这对后续的分子生物学实验，如PCR反应、cDNA文库构建、线粒体转录组研究等奠定了良好的基础。
一种毛竹活性线粒体提取纯化鉴定方法