本发明涉及植物分子遗传学技术领域,具体涉及鉴定两面针性别分子标记、引物组、试剂盒、用途和方法。本发明提供的一种鉴定两面针性别的分子标记,包括特异分子标记和内参分子标记;所述特异分子标记具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列;所述内参分子标记具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列,采用上述分子标记对两面针进行性别鉴定,可随时进行鉴定,且不会因生长状态的不同和生长环境改变而出现不稳定的状况,克服了现有技术中只能在开花期才能区分两面针雌雄株而带来的育种效率低下的问题,实现了在幼苗期与非花期也能进行两面针性别鉴定的技术效果,具有操作简单方便,鉴定准确率高等优点。