[发明专利]一种适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法

说明书

本发明涉及乳鸽遗传性别鉴定技术领域，具体涉及一种适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法，包括步骤S1、采用咽拭子或肛拭子提取乳鸽DNA；步骤S2、利用RAPD引物对乳鸽DNA进行RAPD‑PCR扩增反应，筛选出具有特异性条带的RAPD引物；步骤S3、对筛选出的特异性条带的RAPD引物进行测序，得到该RAPD引物的序列；步骤S4、采用步骤S3的具有特异性条带的RAPD引物，通过RAPD‑PCR结合琼脂糖凝胶电泳对乳鸽进行性别鉴定。本发明首次发现了鸽性染色体新特异序列并将其用于乳鸽性别鉴定的损伤小且准确率高的方法，易于操作，可显著提升鸽育种工作的效率，从而能够在生产上大规模推广使用，具有非常好的应用前景。

技术领域

本发明涉及乳鸽遗传性别鉴定技术领域，具体涉及一种适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法。

背景技术

鸽子是单态鸟，无论在幼鸟还是在成鸟时期，从外观及其行为上进行性别区分是十分困难的。目前，国内外学者在乳鸽性别鉴定方面的应用研究不多，主要是通过外貌体型、性格表现、羽毛外观、腹腔镜检、粪便类固醇检测及核型等方法进行鸽性别鉴定，但这些方法准确率不高，有些鉴定过程繁琐，难以在生产上大规模推广。

鸽子是典型的“一夫一妻”制，出现非雌雄配对时，会彼此打架，影响鸽舍安宁、延迟育种时间、产蛋及受精，不利与生产和后期育种培养。因此，在早期对乳鸽进行性别鉴定有利于减少生产损耗，缩短育种周期，具有较高的经济效益。

随着分子生物学发展，利用分子手段对乳鸽进行性别鉴定，具有准确性高、操作简便、成本低、对动物伤害较小等优点。例如，现有技术中主要的采样方法是利用羽髓上的血细胞进行DNA样品采集。然而，该方法一方面在样品采集时会对乳鸽造成一定的应激，另一方面不同的乳鸽之间可能通过羽毛、粪便等造成DNA交叉污染，影响性别鉴定结果，同样在生产上难以大规模应用。

聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)技术带来了分子生物学的革命，以其为基础的各个DNA多态分析方法也相继出现。其中，随机扩增多态DNA(Randomamplifiedpolymorphic DNA,RAPD)便是这一新技术的产物之一。RAPD即随机引物扩增多态性DNA，是对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术，其基本原理是：采用随机合成的单个引物(一般为10个核苷酸)，对目的基因组DNA进行PCR扩增，然后琼脂糖电泳检测观察是否具有特异条带。

综上，鉴于现有鸽性别鉴定技术中已被发现的鸽性染色体特异序列较少，操作方法较为繁琐，以及在育种实践中乳鸽性别鉴定准确率低且容易造成乳鸽损伤等问题，急需提供一种准确率高、污染概率较小、对乳鸽影响较小的适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种准确率高、污染概率较小、对乳鸽影响较小的适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

提供一种适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法，包括以下步骤：

步骤S1、采用咽拭子或肛拭子提取乳鸽DNA；

步骤S2、利用RAPD引物对步骤S1得到的乳鸽DNA进行RAPD-PCR扩增反应，筛选出具有特异性条带的RAPD引物；

步骤S3、对步骤S2筛选出的特异性条带的RAPD引物进行测序，得到该RAPD引物的序列为5'-TCGGCGATAG-3'；

步骤S4、采用步骤S3的具有特异性条带的RAPD引物，通过RAPD-PCR结合琼脂糖凝胶电泳对乳鸽进行性别鉴定。

上述技术方案中，步骤S1中，采用医用消毒棉签在乳鸽的口腔内或肛门内擦拭10～20次以获得咽拭子或肛拭子，通过微量DNA提取法提取乳鸽DNA。