[发明专利]一种适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法

权利要求书

1.一种适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤S1、采用咽拭子或肛拭子提取乳鸽DNA；

步骤S2、利用RAPD引物对步骤S1得到的乳鸽DNA进行RAPD-PCR扩增反应，筛选出具有特异性条带的RAPD引物；

步骤S3、对步骤S2筛选出的特异性条带的RAPD引物进行测序，得到该RAPD引物的序列为5'-TCGGCGATAG-3'；

步骤S4、采用步骤S3的具有特异性条带的RAPD引物，通过RAPD-PCR结合琼脂糖凝胶电泳对乳鸽进行性别鉴定。

2.根据权利要求1所述的一种适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法，其特征在于：步骤S1中，采用医用消毒棉签在乳鸽的口腔内或肛门内擦拭10～20次以获得咽拭子或肛拭子，通过微量DNA提取法提取乳鸽DNA。

3.根据权利要求1所述的一种适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法，其特征在于：步骤S1中，采用咽拭子DNA提取试剂盒进行提取，所述咽拭子DNA提取试剂盒为北京庄盟国际生物基因科技有限公司生产的型号为ZP321-1的试剂盒。

4.根据权利要求1所述的一种适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法，其特征在于：步骤S1中，乳鸽DNA的浓度为20ng/μl以上，A260/A280值为1.8～2.0。

5.根据权利要求1所述的一种适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法，其特征在于：步骤S2中，选择确定了已知性别的乳鸽DNA为模板DNA；所述RAPD引物的数量为100条，每个所述RAPD引物含有10个碱基，并且所述RAPD引物是单个加入，而不是成对加入。

6.根据权利要求5所述的一种适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法，其特征在于：所述模板DNA为3只不同雄鸽的DNA和3只不同雌鸽的DNA 。

7.根据权利要求1所述的一种适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法，其特征在于：步骤S2的RAPD-PCR反应体系中含有：2×TaqPCRStarMix(Dye)10μL，RAPD引物2μL，模板DNA1μL，去离子水7μL，总体积为20μL；。

8.根据权利要求1所述的一种适用于育种实践的乳鸽早期无损性别鉴定方法，其特征在于：步骤S2的RAPD-PCR反应条件为：94℃预变形5min，94℃变形1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，共45个循环；72℃延伸5min，然后于4℃保存。