[发明专利]核苷酸类似物及其在测序中的应用

权利要求书

1.结构式如式(Ⅰ)所示的核苷酸类似物：

其中，R¹包括任选的正交断裂基团；

R²包括碱基；

R³包括羟基、磷酸酯基团中的任一种；

R⁴包括氢、OR⁵中的任一种，R⁵为任选的正交断裂基团；

优选地，所述R¹、R²、R³、R⁴中的至少一个还连接有可检测的标签。

2.根据权利要求1所述的核苷酸类似物，其特征在于，所述正交断裂基团为亲二烯类基团。

3.根据权利要求1所述的核苷酸类似物，其特征在于，所述正交断裂基团为-L-R⁶；

其中，L选自不存在、取代或未取代的C1～C10亚烷基、取代或未取代的C1～C10亚杂烷基、取代或未取代的C1～C10亚环烷基、取代或未取代的C1～C10亚杂环烷基、取代或未取代的C6～C10亚芳基和取代或未取代的C6～C10亚杂芳基中的任一种；

R⁶选自取代或未取代的反式环辛烯基团、取代或未取代的降冰片烯基团、取代或未取代的苯并降冰片烯基团、取代或未取代的乙烯基、取代或未取代的氰基、取代或未取代的叠氮苯基。

4.根据权利要求2或3所述的核苷酸类似物，其特征在于，所述正交断裂基团选自以下的任一种：

其中，L¹、L²、L³分别独立地为不存在、酯基、醚基、C1～C6亚烷基中的任一种；

R⁶为氢或硼酸基团。

5.根据权利要求2或3所述的核苷酸类似物，其特征在于，所述正交断裂基团选自以下的任一种：

6.权利要求1至5任一项所述的核苷酸类似物在核酸的测序或合成中的应用。

7.测序方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将模板、聚合酶、权利要求1至5任一项所述的核苷酸类似物以及引物接触，使所述核苷酸类似物按照设定顺序掺入所述引物以延伸；所述核苷酸类似物根据碱基类型的不同连接有四种不同的可检测的标签；

S2：根据掺入所述引物的核苷酸类似物上的所述标签类型鉴定掺入的核苷酸类似物；

S3：使用切割试剂对所述核苷酸类似物进行切除以暴露出3′-OH；

重复步骤S1～S3，确定所述模板的序列。

8.根据权利要求7所述的测序方法，其特征在于，所述切割试剂包括四嗪类化合物；

优选的，所述四嗪类化合物具有如式(Ⅱ)的通式：

其中，R⁷、R⁸分别独立选自氢、取代或未取代的C1～C10烷基、取代或未取代的C1～C10杂烷基、取代或未取代的C1～C10环烷基、取代或未取代的C1～C10杂环烷基、取代或未取代的C6～C10芳基和取代或未取代的C6～C10杂芳基中的任一种。

9.核酸的合成方法，其特征在于，包括使用权利要求1至5任一项所述的核苷酸类似物作为合成原料；

优选的，所述合成方法为化学合成或酶促合成。

10.组合物，其特征在于，包括权利要求1至5任一项所述的核苷酸类似物。