[发明专利]与猪肌纤维、肋骨数及背膘厚相关的分子标记、引物、检测方法及应用

权利要求书

1.一种与猪肌纤维的周长、面积以及肋骨数和平均背膘厚相关的分子标记，所述分子标记位于MYLPF基因中，所述分子标记序列如SEQ ID NO:4所示，该序列位于MYLPF基因202转录本第一外显子处，用于检测SNP位点突变。

2.一种扩增如权利要求1所述的猪肌纤维的周长、面积以及肋骨数和平均背膘厚相关的分子标记的引物对，所述引物对的正向核苷酸序列为：

MYLPF_M_F：TCCACATCTCTCGTTAGAACCCTCCCTTGGTATCACTCAT，如SEQ IDNO:5所示，

所述引物对的反向核苷酸序列为：

MYLPF_M_R:ACGGAGGGCAGGAAGGTATG，如SEQ ID NO:6所示。

3.如权利要求1所述的分子标记在猪肉质性状相关分子标记辅助育种中的应用。

4.如权利要求1所述的引物对在猪肉质性状相关分子标记辅助育种中的应用。

5.一种利用权利要求1所述的分子标记检测猪MYLPF方法，包括以下步骤：

S1：设计引物，针对MYLPF基因202转录本在第一外显子区域检测到的SNP位点突变，设计特异性引物：

MYLPF_M_F：TCCACATCTCTCGTTAGAACCCTCCCTTGGTATCACTCAT，如SEQ IDNO:5所示，

MYLPF_M_R:ACGGAGGGCAGGAAGGTATG，如SEQ ID NO:6所示；

S2：对猪的基因组DNA进行PCR扩增；

S3：对PCR产物酶切，并进行电泳判断基因型。

6.根据权利要求5所述的检测猪MYLPF基因突变的方法，所述步骤S2中，PCR反应总体系为10L，其中包括1μL的猪基因组DNA，浓度为50ng/μL；5μL的2×Taq PCR Mix；10μM的正、反向特异性引物各0.2μL；3.6μL的无菌水；扩增条件为：95℃预变性3min；95℃变性30s；60℃退火30s；72℃延伸12s；35个循环；72℃终止延伸5min；15℃冷却2min；PCR产物用2％的琼脂糖凝胶电泳检测。

7.根据权利要求5所述的检测猪MYLPF基因突变的方法，所述步骤S3中，酶切反应体积是5μL，其中10×NEBuffer 0.5μL；PCR产物1.5μL；NlaIII限制性内切酶0.1μL；无菌水2.9μL；振荡混匀之后离心；然后37℃酶切15min；酶切产物用6％非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳检测酶切结果，并判断基因型。

8.如权利要求5-7中任一项所述的检测猪MYLPF基因突变的方法在猪肉质性状辅助育种中应用。