[发明专利]一种高效降血压水产品活性肽的制备方法

说明书

本发明属于降血压产品的制备技术领域。一种高效降血压水产品活性肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1、利用胃蛋白酶酶解超高压处理后的鳙鱼肉得到粗多肽，分离、纯化、鉴定；步骤2、利用PepPowerTM多肽合成平台通过固相合成法合成了多肽序列YLRLHF；步骤3、将纳米级材料为溶于水超声后制备得到0.1mg/mL的分散液；步骤4、1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和N‑羟基硫代琥珀酰亚胺加入到分散液中；步骤5、再加入ACE抑制肽YLRLHF，混合均匀后搅拌，得到反应液；步骤6、将步骤5得到的反应液离心，沉淀物洗涤，冷冻干燥后得到高效降血压水产品活性肽。该方法得到的产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制效果好。

技术领域

本发明属于降血压产品的制备技术领域，具体涉及一种降血压水产品活性肽的制备方法。

背景技术

高血压作为中风的危险性因素之一，影响着全球20％-45％的人口，尤其是50％-60％的老年人。血管紧张素-I-转换酶(EC 3.4.15.1；ACE)是一种金属羧肽酶，可调节肾素-血管紧张素系统中的血压，它水解血管紧张素I羧基末端二肽His-Leu以获得血管紧张素II，血管紧张素II增强心肌的收缩力，导致血管平滑肌收缩和血压升高，因此，抑制ACE活性是降血压的重要手段。人工合成的血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂会产生副作用，如：过敏反应、肾衰竭等，因此，他们不适合长期服用。从动物蛋白中提取的天然降血压肽因环保、可持续、低成本、无毒副作用等优点而受到世界各国的广泛关注。从生物资源可持续开发利用的角度看，动物加工过程中产生的副产物或废弃物中的蛋白质资源具有很大的生物活性肽生产潜力。

然而，目前天然来源的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的效果还有待提高，其在体内的稳定性较差、易被胃肠道中的酶水解，不能很好的发挥其降血压功效。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效降血压水产品活性肽的制备方法，该方法得到的产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制效果好。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种高效降血压水产品活性肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤1、利用胃蛋白酶酶解超高压处理后的鳙鱼肉得到粗多肽，将粗多肽进行分离、纯化、鉴定后筛选出ACE潜在活性最大的肽段YLRLHF；具体步骤如下：

1)粗多肽的制备：

300MPa超高压处理鳙鱼肉20min，得到超高压处理后的鳙鱼肉；按超高压处理后的鳙鱼肉：水的质量比＝1：5，在超高压处理后的鳙鱼肉中加入水(调节pH＝3)，加入4000μ/g的胃蛋白酶，在55℃水浴下反应6h；95℃水浴中加热10min终止反应，水解产物离心，收集上清液利用透析袋(MD77-5M)透析除盐即为粗多肽；

2)多肽的分离、纯化：

将粗多肽使用装有5kDa截留超滤膜的超滤杯超滤，膜压力为0.05MPa，得到分子量5kDa和5kDa的两个级分，5kDa被冻干后利用质谱测定氨基酸序列，选取置信值＞99％的肽段通过PeptideRanker软件进行活性评分，对评分结果＞0.5的肽段进行分子对接，根据分子对接结果筛选出ACE潜在活性最大的肽段YLRLHF(酪氨酸-亮氨酸-精氨酸-亮氨酸-组氨酸-苯丙氨酸)；

步骤2、利用PepPowerTM多肽合成平台通过固相合成法合成了多肽序列YLRLHF，得到ACE抑制肽YLRLHF；

步骤3、将纳米级材料为溶于水超声2h后制备得到0.1mg/mL的分散液；