[发明专利]一种高效降血压水产品活性肽的制备方法

权利要求书

1.一种高效降血压水产品活性肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤1、利用胃蛋白酶酶解超高压处理后的鳙鱼肉得到粗多肽，将粗多肽进行分离、纯化、鉴定后筛选出ACE潜在活性最大的肽段YLRLHF；具体步骤如下：

1)粗多肽的制备：

300MPa超高压处理鳙鱼肉20min，得到超高压处理后的鳙鱼肉；按超高压处理后的鳙鱼肉：水的质量比＝1：5，在超高压处理后的鳙鱼肉中加入水，加入4000μ/g的胃蛋白酶，在55℃水浴下反应6h；95℃水浴中加热10min终止反应，水解产物离心，收集上清液利用透析袋(MD77-5M)透析除盐即为粗多肽；

2)多肽的分离、纯化：

将粗多肽使用装有5kDa截留超滤膜的超滤杯超滤，膜压力为0.05MPa，得到分子量5kDa和5kDa的两个级分，5kDa被冻干后利用质谱测定氨基酸序列，选取置信值＞99％的肽段通过PeptideRanker软件进行活性评分，对评分结果＞0.5的肽段进行分子对接，根据分子对接结果筛选出ACE潜在活性最大的肽段YLRLHF(酪氨酸-亮氨酸-精氨酸-亮氨酸-组氨酸-苯丙氨酸)；

步骤2、利用PepPowerTM多肽合成平台通过固相合成法合成了多肽序列YLRLHF，得到ACE抑制肽YLRLHF；

步骤3、将纳米级材料溶于水超声2h后制备得到0.1mg/mL的分散液；

所述纳米级材料为：纳米级氧化石墨烯(GO)、羧基介孔二氧化硅纳米颗粒(CarboxylMesoporous Silica Nanoparticles，CMSN)、聚乙二醇包裹金纳米粒子(末端羧基修饰)(Gold Nanoparticles-PEG-N3，GN-P)、羧基功能化的四氧化三铁(DMSA@Fe₃O₄)中的一种；

步骤4、10倍纳米级材料为质量分数的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCl)和20倍纳米级材料为质量分数的N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS)加入到分散液中，并搅拌5min；

步骤5、按步骤2得到的ACE抑制肽YLRLHF：纳米级材料的质量分数为1-2:2-1，再加入步骤2得到的ACE抑制肽YLRLHF，混合均匀后磁力搅拌器上反应6h，得到反应液；

步骤6、将步骤5得到的反应液离心，沉淀物用超纯水洗涤3次，冷冻干燥后得到高效降血压水产品活性肽。

2.如权利要求1所述一种高效降血压水产品活性肽的制备方法，其特征在于，步骤1的粗多肽的制备中水解产物离心为：水解产物在离心力为10000g下离心20min。

3.如权利要求1所述一种高效降血压水产品活性肽的制备方法，其特征在于，所述步骤5中，按步骤2得到的ACE抑制肽YLRLHF：纳米级材料的质量分数最佳为1:2-2:1。