[发明专利]用于检测黄瓜对灰霉病抗性性状的SNP分子标记及其应用

权利要求书

1.一种用于检测黄瓜对灰霉病抗性性状的SNP分子标记，其特征在于：所述SNP标记的位点为黄瓜6号染色体物理位置第27,919,339bp处，该位点的碱基是A或T，该位点碱基为A的黄瓜材料为感灰霉病黄瓜材料，该位点碱基为T的黄瓜材料为抗灰霉病黄瓜材料。

2.根据权利要求1所述的SNP分子标记，其特征在于，所述SNP分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,其中第199位碱基是A或T。

3.一种用于检测权利要求1或2所述的SNP分子标记的特异性引物对，其特征在于，包括引物SNPbc-EcoRI-F、SNPbc-EcoRI-R，所述引物的核酸序列如下：

SNPbc-EcoRI-F:5'-GTATTGCTGCTACTTCCGCT-3'，

SNPbc-EcoRI-R:5'-ATTTCAACGAATCCATGTCAAGCAC-3'。

4.一种用于检测权利要求1或2所述的SNP分子标记的试剂盒，其特征在于：包含权利要求3所述的特异性引物对。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：还包含黄瓜基因组DNA提取试剂、PCR扩增反应试剂、PCR扩增产物测序试剂或者SNP差异位点识别试剂；优选所述SNP差异位点识别试剂包括能够识别SNP差异位点的限制性内切酶，优选还包括聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂；优选所述限制性内切酶为EcoRI。

6.权利要求1或2所述的SNP分子标记在如下(1)-(5)任一中的应用：

(1)鉴定或辅助鉴定黄瓜抗/感灰霉病材料；

(2)鉴定或辅助鉴定黄瓜抗/感灰霉病基因Bc基因；

(3)筛选或者辅助筛选抗灰霉病黄瓜品种；

(4)培育或者辅助培育抗灰霉病黄瓜品种；

(5)黄瓜育种。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：提取待测样品的基因组DNA作为模板，采用权利要求1或2所述的SNP分子标记的扩增引物进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行测序或酶切电泳检测，所述酶切电泳检测指采用能够识别所述SNP分子标记差异位点的限制性内切酶对PCR扩增产物进行酶切，然后对扩增产物进行电泳，优选所述电泳采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述SNP分子标记的扩增引物如下：

SNPbc-EcoRI-F:5'-GTATTGCTGCTACTTCCGCT-3'，

SNPbc-EcoRI-R:5'-ATTTCAACGAATCCATGTCAAGCAC-3'。

PCR扩增获得224bp片段，当采用测序检测时，PCR扩增片段的第199位碱基是A的黄瓜材料为感灰霉病黄瓜材料，PCR扩增片段的第199位碱基是T的黄瓜材料为抗灰霉病黄瓜材料；

当采用酶切电泳检测时，所述限制性内切酶为EcoRI，如果酶切后电泳得到224bp的条带，则检测对象为感灰霉病材料；如果酶切后电泳得到196bp的条带，则检测对象为抗灰霉病材料。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：

PCR扩增的反应体系为：7.5ng DNA模板，所述引物的正向引物和反向引物各50ng，5μl2×3G Taq Master Mix for PAGE(Red Dye)，加双蒸水至10ul；

EcoRI酶切的体系为：PCR产物3μl，内切酶0.3μl，NEB cutsmart buffer 1μl，双蒸水5.7μl。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：

所述PCR扩增的反应程序为：95℃预变性3分钟；95℃变性15秒，55℃退火15秒，72℃延伸30秒，35个循环；72℃保温5分钟；

酶切温度为37℃，酶切时间为2h。