[发明专利]检测β-半乳糖苷酶的黄酮衍生物荧光探针及其制备方法和应用、试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种检测β-半乳糖苷酶的黄酮衍生物荧光探针，其特征在于：所述黄酮衍生物荧光探针具有以下结构式：

2.一种权利要求1所述的检测β-半乳糖苷酶的黄酮衍生物荧光探针的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)将EPC、2-羟基苯乙酮和氢氧化钾溶于溶剂中，回流反应至结束，浓缩后柱层析纯化，得到深红色固体EPH，其中EPC和EPH具有以下结构式：

(2)EPH溶解于甲醇，加入氢氧化钠溶液和30％过氧化氢溶液，加热回流反应至结束后倒入冷水中；调节pH后萃取；干燥有机层浓缩，柱层析纯化，得到橙色固体EPHC，其中EPHC具有以下结构式：

(3)将EPHC溶解于无水乙腈，加入N,N-二异丙基乙胺搅拌，加入2,3,4,6-四乙酰氧基-alpha-D-吡喃糖溴化物搅拌至反应结束，萃取，然后用饱和NaCl溶液洗涤有机层，干燥后浓缩，柱层析纯化，得到红色固体AEPT，其中AEPT具有以下结构式：

(4)将AEPT溶解于溶剂，滴加溶于甲醇的甲醇钠，搅拌至反应结束，调节pH值至7，浓缩后柱层析纯化，得到红色固体探针EPTC。

3.如权利要求2所述的检测β-半乳糖苷酶的黄酮衍生物荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤(1)中的溶剂为甲醇或乙醇。

4.如权利要求2所述的检测β-半乳糖苷酶的黄酮衍生物荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤(1)中EPC、2-羟基苯乙酮和氢氧化钾的摩尔比为1:1.75：2.25～1:2:2.5。

5.如权利要求2所述的检测β-半乳糖苷酶的黄酮衍生物荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤(2)中氢氧化钠溶液与30％过氧化氢溶液体积比为4:1～6:1。

6.如权利要求2所述的检测β-半乳糖苷酶的黄酮衍生物荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤(4)中的溶剂为无水甲醇与二氯甲烷的混合溶液，体积比为1:1。

7.如权利要求2所述的检测β-半乳糖苷酶的黄酮衍生物荧光探针的制备方法，其特征在于：步骤(4)中每1mmol的AEPT使用10～12mL的溶剂。

8.一种权利要求1所述的检测β-半乳糖苷酶的黄酮衍生物荧光探针的应用，包括所述荧光探针在水体系和细胞中β-半乳糖苷酶活性检测试剂中的应用。

9.一种检测β-半乳糖苷酶的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的检测β-半乳糖苷酶的黄酮衍生物荧光探针、β-gal标准品以及浓度为0.01mol/L，pH为7.4的PBS缓冲溶液。

10.一种权利要求9所述的检测β-半乳糖苷酶的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)将所述β-gal标准品和所述荧光探针混合反应，得到反应产物；检测激发光下反应产物的荧光强度变化值随β-gal标准品活性的变化值，获取β-gal活性-荧光强度变化值标准曲线，得到β-gal活性-荧光强度变化值线性方程；

(2)在与所述β-gal标准品相同的检测条件下，将β-gal待测样品和所述荧光探针混合反应，得到反应产物；检测激发光下的反应产物的荧光强度变化值，代入所述β-gal活性-荧光强度变化值线性方程中，计算获得所述β-gal待测样品的活性。