[发明专利]基于CRISPR检测脑卒中相关TBXAS1基因的试剂盒

说明书

本发明属于基因检测技术领域，公开了基于CRISPR检测脑卒中相关TBXAS1基因的试剂盒，所述试剂盒包括针对TBXAS1基因rs2267682和rs10487667位点设计的突变型crDNA或突变型crRNA，其序列如SEQ ID NO.1～4所示，结合CRISPR‑cas12a系统，能确定待测样本中是否存在TBXAS1基因rs2267682和/或rs10487667位点的基因突变，具备特异性强、准确性高、检测速度快等优点，应用前景广阔。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种基于CRISPR检测脑卒中相关TBXAS1基因的试剂盒。

背景技术

脑卒中又称中风，在世界范围内，中风是致残和死亡的主要原因。在中国，缺血性中风约占所有中风病例的70％，其发病率表现出显著的地理差异，表现为中国北方的发病率最高，而中国南方的发病率较低。尽管年龄、高血压、糖尿病和环境因素是缺血性中风的众所周知的危险因素，但它是一种多因素多基因疾病。识别与缺血性卒中风险相关的基因变异可以阐明卒中的发病机制，并为预防和治疗这一复杂疾病提供新的方法。尽管一些全基因组关联研究评估了可能导致缺血性中风的各种多态性，而在中国个体中，与缺血性卒中易感性相关的遗传变异尚未明确确定。

血栓素A合酶1(TBXAS1)是花生四烯酸代谢的下游酶，是合成血栓素A2(TXA2)所必需的酶，现有研究认为TXA2与动脉粥样硬化病变的发展和血栓形成有关。rs2267682和rs10487667是TBXAS1基因的两种内含子单核苷酸多态性(SNP)变异，可能影响TBXAS1 mRNA的结构和稳定性，从而影响TXA2的代谢物生成；同时研究表明rs2267682TBXAS1多态性与缺血性卒中相关。

现阶段临床一般通过定量即时聚合酶链锁反应(Quantitative real timepolymerase chain reaction，Q-PCR)、非放射性原位杂交技术(fluorescence insituhybridization，Fish)、多重引物PCR(multiplex PCR)等方式对患者进行基因突变检测，荧光检测具有灵敏度高，选择性好等优点，在生物检测与生化分析中起着不可替代的作用。然而这些检测技术存在检测时间长、过程复杂或检测成本过高等问题，导致无法应用到大规模的临床样本研究中。因此亟需提供一种温度控制简单，且灵敏度、特异性高的特异性片段检测方法。

RNA引导的成簇规则间隔短回文重复序列-CRISPR(CRISPR-Cas)相关方法由于其高可靠性和特异性而在快速核酸检测方面显示出相当大的前景。目前已经开发了几种类型的Cas核酸酶用于CRISPR-Cas系统，例如Cas9、Cas12等，已显示出快速、灵敏和特异性检测核酸的强大实用潜力。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于解决现有技术中检测时间长、成本过高和准确性不高以致无法大规模应用的问题，提供了一种基于CRISPR技术检测与脑卒中相关的TBXAS1基因是否存在rs2267682和/或rs10487667目标突变位点和检测该靶核酸在目标区域是否存在突变的方法和试剂盒。

为了实现上述目的，本发明具体采用以下技术方案：

一种检测试剂盒，所述检测试剂盒包括突变型crDNA或突变型crRNA；

所述突变型crDNA为如下任一：

A1).rs2267682突变型crDNA，其序列如SEQ ID NO.1所示；

A2).rs10487667突变型crDNA，其序列如SEQ ID NO.2所示；

A3).A1)和A2)；

所述突变型crRNA为如下任一：

B1).rs2267682突变型crRNA，其序列如SEQ ID NO.3所示；