[发明专利]一种基于固相载体的DNA分子信号扩增及核酸测序的方法在审
| 申请号： | 202210084194.2 | 申请日： | 2022-01-21 |
| 公开（公告）号： | CN114350773A | 公开（公告）日： | 2022-04-15 |
| 发明（设计）人： | 周魏 | 申请（专利权）人： | 深圳太古语科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869;C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 潘登 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市前海深港合作区前*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 载体 dna 分子 信号 扩增 核酸 方法 | ||
1.一种基于固相载体的DNA分子信号扩增方法，其特征在于，所述方法包括：
通过羧基与氨基的缩合反应，将羧基化的DNA引物固定于表面氨基化的固相载体上，加入环状DNA文库和扩增试剂，进行滚环扩增；
所述DNA引物与所述环状DNA文库通过碱基互补的方式结合。
2.根据权利要求1所述的基于固相载体的DNA分子信号扩增方法，其特征在于，所述固相载体的材质包括玻璃、硅胶、陶瓷、塑料或金属中的任意一种；
优选地，所述羧基化的DNA引物包括5’端羧基化的DNA引物。
3.根据权利要求1或2所述的基于固相载体的DNA分子信号扩增方法，其特征在于，所述扩增试剂包括DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液；
优选地，所述DNA聚合酶包括phi29 DNA聚合酶。
4.根据权利要求1-3任一项所述的基于固相载体的DNA分子信号扩增方法，其特征在于，所述缩合反应使用的缩合剂包括2-琥珀酰亚胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯和二异丙基乙基胺；
优选地，所述缩合剂中2-琥珀酰亚胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯和二异丙基乙基胺的摩尔浓度比为1:(1～4)。
5.根据权利要求1-4任一项所述的基于固相载体的DNA分子信号扩增方法，其特征在于，所述滚环扩增后还包括封闭的步骤。
6.根据权利要求5所述的基于固相载体的DNA分子信号扩增方法，其特征在于，所述封闭包括将封闭试剂加入固相载体上进行封闭；
优选地，所述封闭试剂包括牛血清白蛋白试剂。
7.根据权利要求1-6任一项所述的基于固相载体的DNA分子信号扩增方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)对固相载体进行氨基化处理；
(2)向氨基化的固相载体上加入羧基化的DNA引物和缩合剂，得到负载DNA引物的固相载体；
(3)向所述负载DNA引物的固相载体上加入环状DNA文库和扩增试剂，进行滚环扩增，扩增完成后加入封闭试剂进行封闭。
8.根据权利要求7所述的基于固相载体的DNA分子信号扩增方法，其特征在于，所述氨基化处理的试剂包括3-氨丙基三乙氧基硅烷。
9.一种基于固相载体的核酸测序的方法，其特征在于，所述基于固相载体的核酸测序的方法包括：
利用权利要求1-8任一项所述的基于固相载体的DNA分子信号扩增方法扩增待测DNA，根据碱基互补原则对扩增产物进行核酸测序，得核酸序列信息。
10.根据权利要求9所述的基于固相载体的核酸测序的方法，其特征在于，所述核酸测序包括将所述扩增产物与测序引物混合进行测序反应。
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