[发明专利]一种促乳酸菌生长发酵的肽-锌配合物的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种促乳酸菌生长发酵的肽‑锌配合物的制备方法，包括以下步骤：步骤1、水解：将大豆分离蛋白使用蛋白酶进行水解，得到水解后的蛋白；步骤2、超滤：将水解后的蛋白进行超滤分离处理，得到小分子大豆肽；步骤3、纯化：将小分子大豆肽采用大孔吸附树脂进行吸附和洗脱，得到疏水性的肽；步骤4、反应：将疏水性的肽与硫酸锌溶液在进行反应，得到疏水肽‑锌配合物。本发明促德氏乳杆菌保加利亚亚种的生长和发酵的特性肽‑锌配合物的制备方法，通过大孔吸附树脂进行纯化得到多肽，得到促乳酸菌生长最强的肽‑锌配合物，推进肽‑锌配合物替代无机锌在乳酸菌生和发酵中的作用，实现肽‑锌配合物在乳酸菌生长发酵过程中的促生长作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种促乳酸菌生长发酵的肽-锌配合物的制备方法及应用。

背景技术

德氏乳杆菌保加利亚乳杆菌是发酵的主要菌株之一，通过细胞代谢能将乳糖转化为乳酸等有机酸，生成具有风味物质的乳酸饮品。提升乳酸菌的生长和代谢能力对工业生产具有重要意义。乳酸菌生长过程中必须营养物质含有碳源、氮源、水、微量元素等。目前已证明小分子肽是更有效氮源，利用乳酸菌的吸收以提高乳酸菌增殖和发酵性。锌是生物体必须的微量元素，是生物体多种酶的激活剂，对调控动植物生命活动具有重要意义。研究表明乳酸菌能够富集无机锌，形成更有利于人体吸收的有机锌，且一定量的锌可以提高乳酸菌的活性和增殖量。肽-锌相对无机锌具有更高的生物利用率，低毒性和抗氧化性等特点，因此以肽-锌配合物为营养物质添加在微生物培养基中，以提高乳酸菌的生长和代谢，对提高发酵工业具有重要的意义。

以肽-锌配合物为有机锌的制备研究已经比较成熟，多肽锌相对于无机锌，具有更高的生物活性，如抗氧化性，提高小鼠体内的抗氧化活性，更高的生物利用率等特点。乳酸菌不能分解大分子的蛋白质，需要通过分泌胞外蛋白酶，将大分子的蛋白质分解为小分子的多肽进而吸收到体内用于生长代谢，这样就导致乳酸菌的生长及其酶活性不足，使得乳酸菌的降糖和产酸能力下降。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种促乳酸菌生长发酵的肽-锌配合物的制备方法及应用。

本发明的目的采用以下技术方案来实现：

第一方面，本发明提供一种促乳酸菌生长与发酵的肽-锌配合物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、水解：将大豆分离蛋白使用蛋白酶进行水解，得到水解后的蛋白；

步骤2、超滤：将水解后的蛋白进行超滤分离处理，得到小分子大豆肽；

步骤3、纯化：将小分子大豆肽采用大孔吸附树脂进行吸附和洗脱，得到疏水性的肽；

步骤4、反应：将疏水性的肽与硫酸锌溶液在进行反应，得到疏水肽-锌配合物。

优选地，所述步骤1中，水解过程是先将大豆分离蛋白与蒸馏水混合，再加入蛋白酶进行酶解，之后经过沸水浴与离心处理，得到澄清的多肽溶液。

优选地，所述大豆分离蛋白与所述蒸馏水的混合质量比为1：10。

优选地，所述蛋白酶的加入量为所述大豆分离蛋白质量的2％。

优选地，所述水解的反应温度为55℃，pH为8.0，酶解时间为3h。

优选地，所述沸水浴的时间为10min，离心处理的转速为8000rpm，离心处理的时间为10min。

优选地，所述步骤2中，超滤是采用5000Da的超滤膜进行超滤。

优选地，所述步骤2中，超滤结束后进行冷冻干燥。

优选地，所述步骤3中，先将小分子大豆肽按照10mg/mL的浓度进行溶解，之后再采用大孔吸附树脂进行吸附。