[发明专利]一种检测马铃薯转基因成分和转基因品系的引物组合、试剂盒、检测方法及应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测马铃薯转基因成分和转基因品系的引物组合、试剂盒、检测方法及应用。所述的检测马铃薯常用的转基因元件及转基因品系的引物对组合包括以扩增15种常用马铃薯转基因元件、2种转基因品系特异性序列以及1种马铃薯内参基因ST‑LS1(light‑inducible tissue‑specific gene)的引物组。本发明还涉及检测马铃薯转基因元件、转基因品系的试剂盒与检测方法。本发明技术方案操作简单，检测效率高；检验对象全面，具有较高的检测特异性、准确度和灵敏性；可用于转基因马铃薯及其制品的大规模检测，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种检测马铃薯转基因成分和转基因品系的引物组合、试剂盒、检测方法及应用。

背景技术

马铃薯是仅次于水稻,玉米,小麦的世界第四大食用作物。马铃薯作为世界上重要的农作物之一,具有较高的经济价值,在国际农产品贸易中占有举足轻重的地位。目前,全球共批准商业化种植的转基因马铃薯40余种,主要性状为：抗病,抗虫和品质改良等,欧盟已经批准转基因马铃薯的生产和使用，其中部分产品即将在我国申请转基因生物安全证书。随着大量的转基因马铃薯被直接或间接地制成食品以及国际社会对转基因产品安全性问题的日益关注，农产品中的转基因成分检测已纳入国内外检验检疫部门的检测项目并逐渐得到加强。因此，开发高效、便捷的转基因食品检测技术显得至关重要。

转基因产品的检测技术主要包括基于蛋白的检测方法和基于核酸的检测方法。目前基于核酸的PCR检测方法仍是目前最普遍、最准确的转基因检测技术，其主要包括普通定性PCR、巢式PCR、环介导等温扩增技术(LAMP)、荧光定量PCR多重PCR等方法。相对于普通定性PCR方法，巢式PCR高了检测的灵敏度，容易造成假阳性。LAMP操作简单、特异性强，然而引物设计较为复杂，容易造成DNA污染，影响后续的实验。荧光定量PCR方法具有重复性好、灵敏度高、核酸交叉污染少的优点，但其成本高，并且需要特殊检测仪器。普通的多重PCR方法可以在一个反应中同时检测多个基因，但一般不超过6重，否则引物之间干扰较大，影响检测效果。基因芯片和数字PCR技术也是常用的转基因产品检测技术，它们均具有高通量、灵敏度高、特异性强等优点，且可平行检测1个转基因作物中多个基因或同时检测多种转基因作物；然而其成本高昂，需要专门的仪器设备，要求操作人员具有较高的专业素质，这些因素限制了该技术在检测中的广泛应用。

因此研发一种高效、灵敏和通量高的转基因产品检测方法，成为亟待解决的关键问题。

发明内容

本发提供了一种面检测马铃薯转基因元件、品系的引物对组合、试剂盒及检测方法，以解决基于定量PCR技术通量低、基因芯片和数字PCR技术的转基因检测成本高的技术问题。

本发提供的一种面检测马铃薯转基因元件及品系的技术方案，以15种检测常用的马铃薯转基因元件p35S、t35S、pNOS、pFMV35S、tNOS、PAT、bar、 NPtII、Hpt、cp4epsps、E93、pVYCP、RLRV、pSSuAra、CryIIIa和3个转基因品系EH92-527-1、RH149N09、AV43-6-G7的特异性核苷酸序列即本发明所筛选的靶标分子，以及内参基因ST-LS1作为检测目标，设计多重PCR扩增引物对的核苷酸序列；开发了21对引物，所述引物互相间不影响，可以通过多重PCR进行高效的扩增。所述多重PCR引物组合可以用于开发马铃薯转基因元件及品系检测试剂盒。

具体的技术方案为，第一方面，本申请提供了一种检测马铃薯转基因元件及品系引物对组合，即包括编号StGMO1、StGMO2、StGMO3、StGMO4、StGMO5、 StGMO6、StGMO7、StGMO8、StGMO9、StGMO10、StGMO11、StGMO12、StGMO13、 StGMO14、StGMO15、StGMO16、StGMO17、StGMO18、StGMO19的19对引物，每对引物由正向引物和反向引物组成，具体的引物对组合核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.38所示。