[发明专利]一种检测马铃薯转基因成分和转基因品系的引物组合、试剂盒、检测方法及应用

权利要求书

1.一种检测马铃薯转基因元件及转基因品系的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括编号为StGMO1、StGMO2、StGMO3、StGMO4、StGMO5、StGMO6、StGMO7、StGMO8、StGMO9、StGMO10、StGMO11、StGMO12、StGMO13、StGMO14、StGMO15、StGMO16、StGMO17、StGMO18、StGMO19的19对引物，每对引物由正向引物和反向引物组成，具体的引物组合物核苷酸序列如SEQ ID NO.1－SEQ ID NO.38所示。

2.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物还包括用于扩增马铃薯内参基因ST-LS1的编号为StGMO21、StGMO22的两对引物，每对引物由正向引物和反向引物组成，其核苷酸序列如SEQ ID NO.39－SEQ ID NO.42所示。

3.一种检测马铃薯转基因元件和转基因品系的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的检测马铃薯转基因元件和转基因品系的引物组合物和权利要求2所述的用于扩增马铃薯内参基因ST-LS1的两对引物。

4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括多重PCR预混液。

5.权利要求1或2所述的引物组合物、权利要求3或4的述的检测试剂盒在检测转基因马铃薯及相关产品中的应用。

6.一种检测马铃薯转基因品系的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1）以马铃薯转基因元件、转基因品系的特征核苷酸序列和马铃薯内参基因进行参考，得到多重PCR引物组合物，所述多重PCR引物组合物如SEQ ID NO.1－SEQ ID NO.42所示；

2）得到待测马铃薯的DNA；以所述DNA为模板，将所述多重PCR引物组合物加入反应体系中，进行扩增反应，得到扩增产物；将所述扩增产物进行高通量测序，得到高通量文库；将所述高通量文库中的基因序列进行分析，以实现检测马铃薯常见转基因元件及转基因品系。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述扩增反应的环境/程序包括：94℃预变性5分钟；第一步扩增反应，94℃变性15s，62℃～56℃退火30s，12个Touch Down cycle，每个循环退火及延伸的温度降低0 .5℃；第二步扩增反应，94℃变性15s，57℃退火30S，22个cycle。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，反应体系包括：总体系40μl，引物预混液2.5μl、2×buffer：20μl，多重PCR扩增酶：0.5μl；其余的用水补充；剩余的用水补充；所述高通量文库的浓度大于2ng/ul为合格。