[发明专利]一种附子LAMP组合检测引物、检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种根茎类中药材LAMP组合检测引物、检测试剂盒及检测方法。LAMP组合检测引物包含：正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向环引物LF及反向环引物LB；检测试剂盒包括LAMP检测引物、LAMP反应液。本发明的检测方法具备高准确性、灵敏度且操作方便，在实现了恒温扩增的同时，还为常见根腐病及白绢病病原菌的检测提供了新的技术平台。该试剂盒可用于生产实践中中药材常见根腐病及白绢病病原菌的高灵敏度快速检测，可在病害侵染植株初期检测病原菌，并能够对田间土壤中病原菌进行检测。本发明为根茎类中药材(如丹参、附子及元胡等)常见根腐病及白绢病的防治提供可靠的技术和理论依据。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种附子LAMP组合检测引物、检测试剂盒及检测方法。

背景技术

尖刀镰孢菌（Fusarium oxysporum）属于真菌界（Eumycetes）、子囊菌门（Ascomycota）、粪壳菌纲（Sordariomycetes）、肉座目（Hypocreales）、赤壳科（Nectriaceae）、镰刀菌属（Fusarium）。是一类既可侵染植物又可在土壤内生存的兼性寄生真菌，是中药材（附子、元胡、丹参等）常见根腐病的病原菌。且其侵染引起的植物枯萎病是一种世界性的土传真菌病害。寄主范围广泛，可引起瓜类、茄科、香蕉、棉、豆科及花卉等100多种植物枯萎病的发生。病菌从根部祸害植物，引起维管束病害，造成植株枯死，在植株的全生育期均可发生，对生产造成了巨大的损失。建立Fusarium oxysporum的快速分子检测技术对病害早期控制具有重要意义。

腐皮镰孢菌（Fusarium solani）又称茄病镰刀菌，属于真菌界（Eumycetes）、子囊菌门（Ascomycota）、粪壳菌纲（Sordariomycetes）、肉座目（Hypocreales）、赤壳科（Nectriaceae）、镰刀菌属（Fusarium）。寄生或腐生，常分布于罹病植物的根、茎、果、种子或是土壤中，是附子根腐病的病原菌。也可引起丹参、元胡的根腐病。且腐皮镰孢菌寄主范围广泛，除了造成多种植物的根腐病、茎腐病外，还可以侵染引起咖啡、桃子和香蕉等的果腐病，造成芒果、茶叶、刺桐等的叶斑和枯萎病。建立Fusarium solani的分子快检技术对病害早期控制具有重要意义。

卷枝毛霉（Mucor circinelloides）属于真菌界（Eumycetes）、毛霉门（Mucoromycota）、毛霉纲（Mucoromycetes）、毛霉目（Mucorales）、毛霉科（Mucoraceae）、毛霉属（Mucor）。卷枝毛霉是一种土传性致病真菌，传播蔓延快，是附子萎黄病的病原菌。目前对该病害还没有有效的检测防治措施，所以建立Mucor circinelloides的快速分子检测对于其引起的疾病早期控制具有重要意义。

齐整小核杆菌（Athelia rolfsii）属于真菌界（Eumycetes）、担子菌门（Basidiomycota）、伞菌纲（Agaricomycetes）、阿太菌目（Atheliales）、阿太菌科（Atheliaceae）、阿太菌属（Athelia）。齐整小核杆菌是一种土传性致病菌，腐生性较强，寄主范围广，能侵害作物、花卉、农林植物等多种植物，引发白绢病。包括马铃薯、西红柿、韭菜、三角叶等经济作物以及白术、鱼腥草、元胡、丹参、附子等中药材植物。并具世界性分布且已成为许多农作物苗期病害的重要致病菌之一。目前对该病害还没有有效的检测防治措施，所以建立Athelia rolfsii的快速分子检测技术对病害早期控制具有重要意义。