[发明专利]一种附子LAMP组合检测引物、检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种附子LAMP组合检测引物，其特征在于，包括：

Fusarium oxysporum的LAMP引物：正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP及正向环引物LF；具体为：

F3：AGTTTCTGATTATTACCTCCTAGT；

B3：GCGTTCTCATATTTACAATTGTTG；

FIP：GCTATGACTTTGTAATCCTGAT-GGTATTTTCAGCCATAATTGAAG；

BIP：CGGACCAAGTGTAGATCTTGC-CCTAATAAACTACTTACCCCTGTT；

LF：TCAACCTGTACCCACTCCAC；

Fusarium solani的LAMP引物：正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向环引物LF及反向环引物LB；具体为：

F3：GGGCGACGTTGGACAAAG；

B3：GGTGATACCACGCTCACG；

FIP：CCGGTTAGCGTCTGTTGTGA-CCCTGATCCCTGCACACA；

BIP：GGTCCAACAATAGGAAGCCG-CAAGGACCCAGGCGTACT；

LF：CGCCAAGAGGGTTTGGTGTTTTT；

LB：TGAGCTCGGTAAGGGTTCC；

Mucor circinelloides的LAMP引物：正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向环引物LF及反向环引物LB；具体为：

F3：TAAGTCATTGATAAAGTCCAGTT；

B3：ACCGACCTTGGTGACATTAC；

FIP：GGGAATTCAGTAGGTCCCCAA- ATTGAGCATTCTATTCATCCGT；

BIP：GGTAAGTTTTTTCATGCAAATACAT- TTCGTGACCTAGAGATGACG；

LF：CATCAACAGTGTGCTATTGAAT；

LB：GTCATTTGGCGATATACTAAA；

Athelia rolfsii的LAMP引物：正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP及反向内引物BIP；具体为：

F3：GAATTGCAGAATCCAGTGAAT

B3：GGCATTTCTACATGTCCTACT

FIP：GACTCTCAAACAGGCATGCC-CATCGAATCTTTGAACGCAC；

BIP：TTGTCAAGGCTTGGATGTGAG-ATTTTAAAGAGAGCCAGTCAGAT。

2.一种附子LAMP组合检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒中包含权利要求1所述的LAMP组合检测引物。

3.根据权利要求2所述的附子LAMP组合检测试剂盒，其特征在于，包含：

Fusarium oxysporum的LAMP检测溶液：0.2 μM正向外引物F3，0.2 μM反向外引物B3，1.6 μM正向内引物FIP，1.6 μM反向内引物BIP，0.8 μM正向环引物LF，1.4 mM dNTPs，1×LAMP Buffer，1×二甲酚橙，0.8 M甜菜碱，8 mM MgS0₄，0.32 U/μL Bst DNA polymerase；

Fusarium solani的LAMP检测溶液：0.2 μM正向外引物F3，0.2 μM反向外引物B3，1.6 μM正向内引物FIP，1.6 μM反向内引物BIP，0.8 μM正向环引物LF，0.8 μM反向环引物LB，1.4mM dNTPs，1×LAMP Buffer，1×二甲酚橙，0.8 M甜菜碱，8 mM MgS0₄，0.32U/μL Bst DNApolymerase；

Mucor circinelloides的LAMP检测溶液：0.2 μM正向外引物F3，0.2 μM反向外引物B3，1.6 μM正向内引物FIP，1.6 μM反向内引物BIP，1.6μM正向环引物LF，0.8μM反向环引物LB，1.4mM dNTPs，1× LAMP Buffer，1×二甲酚橙，0.8M甜菜碱，8mM MgS0₄，0.32U/μL Bst DNApolymerase；

Athelia rolfsii的LAMP检测溶液：0.2 μM正向外引物F3，0.2 μM反向外引物B3，1.6 μM正向内引物FIP，1.6 μM反向内引物BIP，1.4 mM dNTPs，1× LAMP Buffer，1×二甲酚橙，0.8 M甜菜碱，8 mM MgS0₄，0.32U/μL Bst DNA polymerase。