[发明专利]一种还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法在审
| 申请号： | 202111432318.3 | 申请日： | 2021-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN114107412A | 公开（公告）日： | 2022-03-01 |
| 发明（设计）人： | 丁雪峰;钱明;李佳松;李帅杰;刘珊珊 | 申请（专利权）人： | 南京诺云生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/36 | 分类号： | C12P19/36;C12N9/96;C12N9/02 |
| 代理公司： | 常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙) 32231 | 代理人： | 张红艳 |
| 地址： | 210000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 原型 烟酰胺腺 嘌呤 核苷酸 制备 方法 | ||
1.一种还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)高温条件下甲酸脱氢酶活性的筛选
将若干种甲酸脱氢酶干粉分别按比例稀释后，各取500μl加入48℃水浴锅中温育15分钟，对甲酸脱氢酶的活力进行测定，根据测定结果筛选得到高温条件下具有较高活性的甲酸脱氢酶；
(2)酸性条件下甲酸脱氢酶活性的筛选
将若干种甲酸脱氢酶干粉分别按比例稀释后，将反应体系的pH均调整为酸性，对甲酸脱氢酶的活力进行测定，根据测定结果筛选得到酸性条件下具有较高活性的甲酸脱氢酶；
(3)还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备
根据步骤(1)和步骤(2)的结果，选择在高温条件和酸性条件下同时具有较高活性的甲酸脱氢酶待用；
分别称取甲酸铵、NAD至烧瓶中，加纯水，在水浴中搅拌溶解并使用氢氧化钠调节pH为酸性；最后加入筛选得到的甲酸脱氢酶开始反应，并用氢氧化钠维持pH为酸性，制得还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。
2.根据权利要求1所述的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的甲酸脱氢酶活力测定方法具体为，在2ml反应体系中，依次加入0.5ml100mM pH7.5PBS缓冲液，加入终浓度1mM NAD，20mM甲酸铵，加双蒸水补至1.9ml，充分混匀后置于25℃水浴中；
取100μl样品加入反应体系中，混匀后于340nm处检测每分钟的吸光度变化值，参照NADH标准曲线计算甲酸脱氢酶的酶活。
3.根据权利要求1所述的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的甲酸脱氢酶活力测定方法具体为，将反应体系pH调整为6.3，在2ml反应体系中，依次加入0.5ml 100mM pH 6.3PBS缓冲液，加入终浓度1mM NAD，20mM甲酸铵，加双蒸水补至1.9ml，充分混匀后置于25℃水浴中；
取100μl样品加入反应体系中，混匀后于340nm处检测每分钟的吸光度变化值。参照NADH标准曲线计算甲酸脱氢酶的酶活。
4.根据权利要求1所述的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)的具体方法为，分别称取0.7克甲酸铵、2克NAD至250ml烧瓶中，加16ml纯水，在45℃水浴中搅拌溶解并使用5M氢氧化钠调节pH至6.3，并将总体系定容至20ml，此时底物起始浓度为100g/L；最后加入0.1g筛选所得的甲酸脱氢酶的冻干酶粉开始反应，并用5M氢氧化钠维持pH在6.3，制得还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。
5.根据权利要求4所述的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)的反应时间为10分钟～30分钟。
6.根据权利要求1所述的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)和步骤(2)中甲酸脱氢酶干粉的稀释比例为，按质量稀释100-500倍。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京诺云生物科技有限公司，未经南京诺云生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202111432318.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
