[发明专利]用于检测食道癌的组合物及其用途

权利要求书

1.一种用于体外检测食管癌的组合物，所述组合物包括：

用于检测目标基因靶序列甲基化状态的核酸，以及

用于检测目标蛋白浓度的抗体，

其中，所述目标基因为MT1A基因和EPO基因中的一种或两种，

所述目标蛋白为γ突触核蛋白(SNCG)。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述MT1A基因的靶序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述EPO基因的靶序列如SEQ ID NO:3所示。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的组合物，其中，所述用于检测目标基因靶序列甲基化状态的核酸包括：

所述目标基因靶序列中至少9个核苷酸的片段，

所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，其中，所述用于检测目标基因靶序列甲基化状态的核酸包括：

在中等严紧或严紧条件下杂交于所述目标基因靶序列中至少15个核苷酸的片段，

所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的组合物，其还包括：

将目标基因靶序列的5位未甲基化胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶的试剂。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的组合物，其中，所述用于检测目标基因甲基化状态的核酸还包括：

优先与处于非甲基化状态的靶序列结合的阻断剂。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中，

所述至少9个核苷酸的片段，其为SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的序列，或者其为SEQ IDNO:9和SEQ ID NO:10的序列，

所述至少15个核苷酸的片段，其为SEQ ID NO:7的序列或SEQ ID NO:11的序列，

阻断剂，其为SEQ ID NO:8的序列或SEQ ID NO:12的序列。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的组合物，所述组合物还包括：

用于检测目标蛋白浓度的试剂，所述试剂为酶联免疫吸附测定试剂，例如，所述试剂包括用于检测目标蛋白浓度的抗体包被的反应板，SNCG蛋白酶结合物，底物液，洗液和终止液。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的组合物在用于制备用于体外检测食管癌的试剂盒中的用途。

11.根据权利要求10所述的用途，其中，所述用于体外检测食管癌的试剂盒通过包括如下步骤的方法来检测食管癌：

提取受试者的生物样品，

提取生物样品中的包括目标基因靶序列或其片段的DNA样品；

确定所述目标基因靶序列的甲基化状态；

确定生物样品中所述目标蛋白浓度；以及

通过所述目标基因靶序列甲基化状态和目标蛋白浓度的检测结果联合判断受试者是否患有食管癌，从而实现对食管癌的体外检测。

12.根据权利要求10所述的用途，其中，所述方法包括如下步骤：

抽取受试者的外周血；

从外周血样本中分离出血浆或血清；

从血浆或血清中提取游离DNA；

使用试剂处理提取的游离DNA，使5位未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶或其它碱基；

将试剂处理过的DNA样品与DNA聚合酶和目标基因靶序列的引物接触，并在优先与处于非甲基化状态的靶序列结合的阻断剂的存在下进行DNA聚合反应；

用探针检测扩增产物；

基于所述扩增产物是否存在，确定所述目标基因靶序列的至少一个CpG二核苷酸的甲基化状态；

使用SNCG抗体，通过免疫反应，确定血浆或血清中SNCG蛋白的浓度。

13.根据权利要求12所述的用途，其中，所述试剂为亚硫酸氢盐试剂。