[发明专利]林麝微卫星位点组合、引物组合、试剂盒及个体示踪应用

说明书

本发明涉及林麝微卫星标记技术，具体涉及一种林麝微卫星位点组合、引物组合、试剂盒及个体示踪应用，其目的是解决现有采用微卫星标记位点技术进行林麝基因鉴定中存在鉴定结果不够准确的技术问题，提供一种林麝微卫星位点组合、引物组合、试剂盒及个体示踪应用，通过采用四碱基重复的合适的位点组合，实现了基于基因鉴定的林麝准确个体示踪。本发明采用筛选出的最能反映林麝基因特点的8个微卫星位点，并给出了相应的引物组合、试剂盒，利用引物组合、试剂盒，实现了林麝的高精度个体示踪，精确度达到99.999％，具有快速、准确、简便和实现成本较低的优点。

技术领域

本发明涉及林麝微卫星标记技术，具体涉及一种林麝微卫星位点组合、引物组合、试剂盒及个体示踪应用。

背景技术

林麝(Moschus berezovskii)隶属偶蹄目(Artiodactyla)、反刍亚目(Ruminantia)、麝属(Moschus)、麝种(Moschus berezovskii)，是麝属中体型最小的动物，因成年雄性林麝分泌珍贵麝香而闻名。由于麝香具有巨大的经济价值，导致林麝被大规模偷盗捕杀，林麝种群数量锐减，2002年，林麝被列为国家一级重点保护动物，在2008年的世界自然保护联盟(IUCN)濒危物种红色名录中，林麝被评为濒危物种。自1958年开始驯养林麝，经过60余年的发展，林麝驯养已成为具有一定规模的产业，实现了圈养及繁殖，并于驯养初期实现了可持续的人工活体取香，从而使林麝驯养成为麝香可持续供应的合法基础，也是林麝物种保护的重要途径。

传统的个体标记有多种方式。在许多家畜饲养中，古老的表皮烙印和身体局部缺刻标记的方法较为普遍。这两种方法的好处是对于温顺和长期驯化的动物，可以做到终身标记，且对动物本身没有致命伤害。但是，对于驯化历史短、应激性强的野生动物，这样的标记方法容易引起致死性的应激反应和感染。近十几年来，在有蹄类动物饲养中发展了耳标标记，有利于监测动物的检疫状态和进行个体跟踪，对于更大规模的动物种群管理，近些年又发展出了电子耳标，通过识读器，可以快速监控和跟踪标记个体的数量和检疫状态，进行分类管理和实时监控。近些年新发展的体内植入式胶囊芯片，更是避免了体外悬挂容易脱落的问题，可终身携带。但是，这些标记方法在实际应用中仍有难以克服的不足之处，如塑料耳标标记，是目前较为常用的标记方式，但仍然普遍存在刺激，容易脱落和感染，对没有耳标标记的个体，难以判断是否属于外来麝源，给保护和监管带来了不便，导致难于监管问题的出现；采用电子耳标，仍然存在刺激，且跟踪和识读受仪器工作状态的限制；而体内植入的标记难以远距离探测和识别。因此，在个体示踪(个体识别)中，运用于个体的终身携带、唯一的生物标记必不可少。

现有的微卫星标记技术，是一种基因鉴定技术，可应用于个体示踪及种群关系研究，其微卫星DNA也称为短串联序列重复(short tandem repeat，STR)或者简单序列重复(simple sequence repeat，SSR)，是一类简单的以核苷酸为基本单位的串联重复序列，微卫星DNA由核心序列和两侧的保守序列组成，其中侧翼序列将微卫星DNA特异的定位于染色体的某一区域，而核心序列的重复数则形成了微卫星DNA的多态性。通常核心序列重复单元长2-6碱基，如(CA)n、(GAG)n、(GACA)n，n为重复次数，为10-60次，由于重复次数不同使其呈现丰富的长度多态性。微卫星DNA多位于编码区附近，也可位于基因内的间隔区、外显子、内含子和调控区域，且分布均匀。微卫星在基因组中数目巨大，据估计，真核基因组中平均每6kb就存在一个微卫星序列。微卫星位点的多态性越高，标记位点数量越多，个体鉴定的准确性就越高。微卫星标记符合孟德尔遗传特征，世代传承，变异频率较慢，但是每个个体又有差异，因此是一种可靠的个体示踪的终身遗传标记。对于麝科动物这类珍稀物种来说，其微卫星标记的开发和应用研究无疑显得更加迫切，更加必要，更加有意义。然而，与其他圈养经济动物相比，林麝微卫星标记的开发和应用报道较少，这可能与林麝保护级别高、数量少、受分布区域限制等因素有关。

综上，目前亟需一种能够对林麝进行准确个体示踪的微卫星位点组合、引物组合、试剂盒，以便于林麝的饲养和研究等方面的应用。

发明内容