[发明专利]3’-O-可逆封闭的核苷酸及其在无模板酶促核酸合成中的应用

权利要求书

1.一种3’-O-封闭的核苷酸，其特征在于，封闭基团为氰基乙烯基。

2.根据权利要求1所述的核苷酸，其特征在于，所述核苷酸选自脱氧腺苷酸及衍生物、脱氧鸟苷酸及衍生物、脱氧胞苷酸及衍生物、脱氧胸苷酸及衍生物、腺苷酸及衍生物、鸟苷酸及衍生物、胞苷酸及衍生物和尿苷酸及衍生物中的任一种。

3.权利要求1或2所述3’-O-封闭的核苷酸在酶促核酸合成中的应用；

优选地，所述酶为TdT酶；

优选地，所述酶促核酸合成为可逆终止的无模板酶促核酸合成。

4.权利要求1或2所述3’-O-封闭的核苷酸的制备方法，其特征在于，用3’-O-氰基乙烯基替代核苷酸的3’-OH，得到3’-O-封闭的核苷酸。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，核苷酸的3’-OH先与甲酸发生酯化反应生成甲酯，再与三苯基亚正膦基乙腈反应生成3’-O-氰基乙烯基，得到3’-O-封闭的核苷酸；

优选地，以5’-OTBDMS保护核苷为原料，5’-OTBDMS保护核苷的3’-OH先与甲酸发生酯化反应生成甲酯，再与三苯基亚正膦基乙腈反应生成3’-O-氰基乙烯基，得到3’-O-氰基乙烯基后，依次经脱除5’-OTBDMS和磷酸化，得到3’-O-封闭的核苷酸。

6.权利要求1或2所述3’-O-封闭的核苷酸的脱保护方法，其特征在于，采用裂解剂将3’-O-封闭的核苷酸中的封闭基团切割，得到3’-OH核苷酸。

7.根据权利要求6所述的脱保护方法，其特征在于，所述裂解剂为钯络合物，优选为二乙腈二氯化钯；

优选地，二乙腈二氯化钯浓度为0.04-0.06M，切割条件为55-65℃反应0.5-10min。

8.一种酶促核酸合成的方法，其特征在于，所述方法的原料包括权利要求1或2所述的3’-O-封闭的核苷酸。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述酶促核酸合成为可逆终止的无模板酶促核酸合成；

优选地，所述酶为TdT酶；

优选地，利用权利要求6或7所述的脱保护方法实现核酸延伸终止的重启。

10.基于权利要求8或9所述方法生成核酸的合成仪器。