[发明专利]一种蔗糖合成酶及其在催化糖基化反应中的应用在审
| 申请号： | 202110582880.8 | 申请日： | 2021-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN115404226A | 公开（公告）日： | 2022-11-29 |
| 发明（设计）人： | 贾红华;李艳;马蕊琪;潘华祎;陶叶慧;余杰;林磊;严明 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/18;C12P19/60;C12P19/44;C12P33/20;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京新慧恒诚知识产权代理有限公司 32424 | 代理人： | 王月霞 |
| 地址： | 211816 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蔗糖 合成 及其 催化 糖基化 反应 中的 应用 | ||
1.一种蔗糖合成酶，其特征在于，所述蔗糖合成酶来源于微芒藻（
2.编码来源于微芒藻的蔗糖合成酶的核苷酸序列，所述序列如SEQ No.1所示。
3.一种重组载体，其携带编码所述蔗糖合成酶的核苷酸序列SEQ No.1。
4.权利要求1所述蔗糖合成酶在酶法催化糖基化反应中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
1)、构建工程菌：克隆UDP-糖基转移酶基因与蔗糖合成酶基因，构建双酶共表达或分别表达的载体，并转移到宿主菌中，获得UDP-糖基转移酶和/或蔗糖合成酶的工程菌，所述蔗糖合成酶基因序列如SEQ No.1所示；
2）、制备糖基化产物：将构建好的工程菌发酵产酶，发酵得到的菌体超声破碎或高压破碎，获得UDP-糖基转移酶和蔗糖合成酶的粗酶液；
3）、将粗酶液、糖基化底物、蔗糖在转化体系中进行糖基化反应； UDP-糖基转移酶催化底物进行转化反应制备得到糖基化产物；蔗糖合成酶将该过程生成的UDP催化生成UDP-葡萄糖作为糖基供体。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述糖基化底物包括但不限于甜菊糖苷类、槲皮素、姜黄素或者人参皂苷。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的宿主菌为大肠杆菌、酿酒酵母、毕赤酵母或者谷氨酸棒杆菌。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述糖基化底物的初始反应浓度为1-20g/L，蔗糖与糖基化底物的质量比为1-200，粗酶液在反应体系中的总蛋白浓度为2-10 mg/mL。
9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述转化反应采用水相或双相体系，粗酶液在pH6-8的缓冲溶液中进行生物转化。
10.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述转化反应的反应温度为20-50℃，反应时间为1-40h。
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