[发明专利]一种牛传染性鼻气管炎病毒的检测方法在审
| 申请号： | 202110492607.6 | 申请日： | 2021-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN112981010A | 公开（公告）日： | 2021-06-18 |
| 发明（设计）人： | 姚刚;付强;任强林;马义诚;张杨;马雪连;苏战强;陈卓;夏瑞阳;李鑫;李紫仟;金肖叶;郭雪萍 | 申请（专利权）人： | 新疆农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 乌鲁木齐博亚思知识产权代理事务所(普通合伙) 65110 | 代理人： | 王志刚 |
| 地址： | 830052 新疆维吾尔自*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种牛 传染性 气管炎 病毒 检测 方法 | ||
1.一种用于检测牛传染性鼻气管炎病毒的特异性目标片段，如SEQ ID NO.1所示。
2.用于扩增权利要求1所述的特异性目标片段的特异性引物对及探针，所述特异性引物对的
上游引物为5'CTACTACAAGCGCGA CATGG 3'，如SEQ ID NO.2所示，
下游引物为5'CACGTGCTGTGTACGC AAA 3'，如SEQ ID NO.3所示；
所述探针为5'HEX-ACCGGCTCCTTGAGGCGCCG-BHQ-1 3'，如SEQ ID NO.4所示，其中，5’端标记有荧光基团HEX，3’端标记有淬灭基团BHQ-1。
3.一种用于检测牛传染性鼻气管炎病毒的TaqMan探针荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：包含有权利要求2所述的特异性引物对和探针。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：检测步骤如下：
步骤1、提取待检测样品的总DNA；
步骤2、以上述DNA为模板，利用TaqMan探针荧光定量PCR试剂盒进行荧光定量PCR扩增得到扩增曲线，其优化后的反应体系如下，总体系为20μL；
步骤3、对所述扩增曲线进行分析，并作出判断。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述步骤2中扩增的反应体系具体包括：权利要求2所述的特异性引物对和探针；2×PerfectStartTMⅡProbe qPCR SuperMix；RNase-free waster；牛传染性鼻气管炎病毒标准阳性质粒；扩增程序为：94℃预变性30s；94℃变性5s；60℃退火和延伸30s，共40个循环。
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