[发明专利]一种长白山东方蜜蜂SSR标记引物组、PCR鉴定方法以及应用

说明书

本发明公开了一种长白山东方蜜蜂SSR标记引物组、PCR鉴定方法以及应用，涉及分子生物学及生物信息学技术领域。本发明针对东方蜜蜂种群，基于三代全长转录组测序开发出东方蜜蜂SSR标记引物，具有快捷高效、开发标记数量多、可用性强等优点，可直接应用于长白山东方蜜蜂种群以及常规的东方蜜蜂种群遗传多样性的分析，为后续东方蜜蜂种质资源的耐寒性评价与鉴定、耐低温蜜蜂品种的分子辅助育种，以及遗传图谱的构建、抗寒性状关联分析、功能基因挖掘和遗传进化等方面的研究提供了技术支持，具有良好的应用前景和科研价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学及生物信息学技术领域，具体而言，涉及一种长白山东方蜜蜂SSR标记引物组、PCR鉴定方法以及应用。

背景技术

在西方蜜蜂没有引入中国之前，东方蜜蜂是唯一可以进行人工饲养而获得产品的蜂种，而长白山东方蜜蜂是长白山植物区系唯一的东方蜜蜂生态型，在维持和丰富陆地生态系统生物多样性以及提供授粉和其他有价值的生态系统服务等方面的作用十分巨大。长白山东方蜜蜂是国家重点保护的蜜蜂品种，被列入《国家级畜禽品种资源保护名录》。然而，长白山东方蜜蜂的群体数量和分布密度呈现出恶性态势，受异域地物种生态入侵、大面积野生动植物栖息地日趋丧失、生物资源过度开发、农业集约化发展、病原微生物感染与扩展、杀虫剂过度使用和滥用以及全球气候变暖和大气污染等生物和非生物因子的影响，种群健康受到胁迫，目前种群数量已不足1万群，处于濒危-维持状态，对长白山东方蜜蜂种群种质遗传资源的保护、利用和挖掘工作迫在眉睫。

蜜蜂的生物学性状中，抗寒性状属于蜜蜂重要的生物学性状之一，与养蜂业的经济效益密切相关，蜜蜂耐寒性能的高低是影响其繁殖情况、越冬死亡率、分布范围和扩散速度的重要因素。在早春和晚秋时期，蜜蜂个体面对低温应激的几率很大，会造成蜜蜂的大量损伤和蜂群群势的下降；在冬季，蜂群以众多工蜂和蜂王的组合通过聚集成团的方式以抵御严寒，蜂群的安全越冬对来年的养蜂生产至关重要。因此，低温冷害是限制养蜂业生产的重要非生物逆境胁迫。在蜜蜂种群中，长白山东方蜜蜂种群的最突出优点就是抗寒性能强。野生在树洞、石洞里的蜂群，在最低温度零下40℃的环境里能够自然越冬，土法饲养在树桶中的蜜蜂放在院内或野外即可越冬。

鉴于此，特提出本发明以为后续东方蜜蜂耐寒种质资源的筛选、挖掘、鉴定及其分子标记辅助育种提供基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种长白山东方蜜蜂SSR标记引物组、PCR鉴定方法以及应用以解决上述技术问题。

本发明是这样实现的：

本发明提供了一种长白山东方蜜蜂SSR标记引物组，引物组包括如下至少一对的引物：第一引物对的序列如SEQ ID NO.1-2所示，第二引物对的序列如SEQ ID NO.3-4所示，第三引物对的序列如SEQ ID NO.5-6所示，第四引物对的序列如SEQ ID NO.7-8所示，第五引物对的序列如SEQ ID NO.9-10所示，第六引物对的序列如SEQ ID NO.11-12所示，第七引物对的序列如SEQ ID NO.13-14所示，第八引物对的序列如SEQ ID NO.15-16所示，第九引物对的序列如SEQ ID NO.17-18所示，第十引物对的序列如SEQ ID NO.19-20所示和第十一引物对的序列如SEQ ID NO.21-22所示。

本发明提供了一种采用上述长白山东方蜜蜂SSR标记引物组进行PCR鉴定的方法，PCR鉴定方法包括如下的反应程序：

94-96℃1-5min；94-98℃25-30s，58-62℃25-30s，70-72℃25-30s，8-10个循环；94-98℃25-30s，55-62℃25-30s，70-72℃25-30s，25-40个循环；70-72℃5-10min。

在本发明应用较佳的实施方式中，上述PCR鉴定的反应体系包括：