本发明公开了从蜜蜂遗传图谱获取的保种蜜蜂诊断性STRs位点的PCR引物及其应用。本发明所要保护的一个技术方案是获取蜜蜂DNA指纹图谱的成套引物对,成套引物对由序列表中SEQ ID No.1‑SEQ ID No.178共89种引物对中的n种引物对组成,n为89至1中的任一自然数。本发明所提供的89个诊断性STRs位点的成套引物对来源于蜜蜂遗传图谱AmeMap3,通过严格的PCR体系和PCR产物分析进行筛选得到,可最大程度地提供蜜蜂STRs固有的遗传背景信息,可用于鉴定保种蜜蜂的DNA分型,大大提高STRs标记技术鉴定保种蜜蜂的可靠性和实用性。