[发明专利]一种葫芦耐热特性的分子标记及其应用

权利要求书

1.一种葫芦耐热特性的分子标记组合在耐热葫芦植株筛选中的应用，其特征在于，所述分子标记组合由SNP1、SNP2和SNP3组成；所述SNP1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，且其中第433位碱基是A或G；所述SNP2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，且其中第199位碱基是G或A；所述SNP3的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，且其中第672位碱基是A或G。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述葫芦耐热特性的分子标记组合的检测引物组，包括：

SNP1的PCR扩增用上游引物的核苷酸序列为5’-GTGAACTCCTTGAGCCCACA-3’,如SEQ IDNO:4所示；

SNP1的PCR扩增用下游引物的核苷酸序列为5’-CACTGCCTTGTTCCTTTGCC-3’,如SEQ IDNO:5所示；

SNP2的PCR扩增用上游引物的核苷酸序列为5’-ACTGCCACATCATCGGTTGT-3’,如SEQ IDNO:6所示；

SNP2的PCR扩增用下游引物的核苷酸序列为5’-GAGCTCGAGATTGCATCGGA-3’,如SEQ IDNO:7所示；

SNP3的PCR扩增用上游引物的核苷酸序列为5’-GCCACCAAAGCTAGCAACAC-3’,如SEQ IDNO:8所示；

SNP3的PCR扩增用下游引物的核苷酸序列为5’-TTGCAGTCGAGGAAGCACAT-3’,如SEQ IDNO:9所示。

3.一种葫芦耐热特性检测方法，其特征在于，通过对待测植株进行分子标记组合的检测，所述分子标记组合由SNP1、SNP2和SNP3组成；所述SNP1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述SNP2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述SNP3的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；当SNP1分子标记的第433位碱基是A时，SNP2分子标记的第199位碱基是G且SNP3分子标记的第672位碱基是A时为耐热性状的植株。

4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）提取待测样本基因组DNA；

（2）以提取的待测样本基因组DNA为模板，利用引物组，进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；

（3）对所述PCR扩增产物进行纯化、测序和鉴定；

所述引物组包括：

SNP1的PCR扩增用上游引物的核苷酸序列为5’-GTGAACTCCTTGAGCCCACA-3’,如SEQ IDNO:4所示；

SNP1的PCR扩增用下游引物的核苷酸序列为5’-CACTGCCTTGTTCCTTTGCC-3’,如SEQ IDNO:5所示；

SNP2的PCR扩增用上游引物的核苷酸序列为5’-ACTGCCACATCATCGGTTGT-3’,如SEQ IDNO:6所示；

SNP2的PCR扩增用下游引物的核苷酸序列为5’-GAGCTCGAGATTGCATCGGA-3’,如SEQ IDNO:7所示；

SNP3的PCR扩增用上游引物的核苷酸序列为5’-GCCACCAAAGCTAGCAACAC-3’,如SEQ IDNO:8所示；

SNP3的PCR扩增用下游引物的核苷酸序列为5’-TTGCAGTCGAGGAAGCACAT-3’,如SEQ IDNO:9所示。

5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）所述PCR的反应体系为5×FastPfu Buffer 4 μl、2.5 mM dNTPs 2 μl、5 μM上游引物 0.8 μl、5 μM下游引物 0.8 μl、FastPfu Polymerase 0.4 μl、模板DNA 10 ng，补ddH2O至20 μl。

6.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）所述PCR的反应程序为95℃ 5min；95℃ 30 s、60℃ 30、72℃ 45 s，30个循环；72℃ 10 min。