[发明专利]高产对氨基苯丙氨酸的重组大肠杆菌构建方法

权利要求书

1.一种合成对氨基苯丙氨酸的大肠杆菌工程菌的构建方法，其特征在于，在大肠杆菌中表达了PAPA合成途径中所需的关键酶；所述关键酶包括4-氨基脱氧分支酸合成酶PapA、4-氨基脱氧分支酸变位酶PapB和4-氨基脱氧预苯酸脱水酶PapC；

所述关键酶选择来自不同宿主的PAPA合成途径，包括始旋链霉菌Streptomyces pristinaespiralis的papB、papC基因以及谷氨酸棒状杆菌Corynebacterium glutamicum的papA基因；

所述方法包括如下步骤：

S1、对所述关键酶基因进行大肠杆菌密码子优化及全合成；得到核苷酸序列依次分别如SEQ ID No.4所示的SppapBC基因、如SEQ ID No.9所示的CgpapA基因；

S2、构建含有CgpapA-SppapBC基因的质粒，导入大肠杆菌MG1655 (DE3)，获得重组菌株；

S3、对重组菌株进行基因工程改造，敲除分支酸变位酶/预苯酸脱水酶基因pheA、分支酸变位酶/预苯酸脱氢酶基因tyrA、邻氨基苯甲酸合成酶基因trpE和4-氨基脱氧分支酸裂解酶基因pabC；

S4、在步骤S3得到的基因工程改造菌株中过表达3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶编码基因aroG^fbr；aroG^fbr基因的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示。

2.一种根据权利要求1所述的合成对氨基苯丙氨酸的大肠杆菌工程菌的构建方法构建得到的大肠杆菌工程菌。

3.一株合成对氨基苯丙氨酸的大肠杆菌工程菌，所述工程菌为大肠杆菌（Escherichiacoli）HXJE72，保藏编号为CGMCC No.21810。

4.一种用于构建合成对氨基苯丙氨酸的大肠杆菌工程菌的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒为含有CgpapA和SppapBC基因的重组质粒；CgpapA基因序列如SEQ ID No.9所示，SppapBC基因序列如SEQ ID No.4所示。