[发明专利]用于检测DNA的组合产品

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种用于检测DNA的组合产品。该产品包括核糖核酸酶H II以及探针；所述探针为单链探针，探针的部分或全部序列能够与待检测的靶标DNA分子互补，且所述探针互补区域内部嵌入一个或多个RNA碱基，所述RNA碱基将探针互补区域分隔为至少两个区段，每个区段中DNA碱基和碱基替代物的总个数≤13个。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种用于检测DNA的组合产品。

背景技术

核酸检测技术在经历了数十年的发展与近几年的快速成熟后，目前已广泛运用于传染病病原检测(包括细菌、支原体、病毒等)、肿瘤突变检测、遗传病检测、个体基因型检测等各个方面。在多个应用领域，如传染病诊断，核酸检测技术的灵敏度与特异性均大幅优于胶体金/免疫荧光法，是多种诊断的金标准。在众多核酸检测技术之中，基于探针杂交的检测技术为人熟知，其能够搭配多种技术进行使用。

现有的探针通常不具有信号放大能力，且还存在检测不便，灵敏度不高等问题。

发明内容

本发明涉及用于检测DNA的组合产品，包括核糖核酸酶H II以及探针；

所述探针为单链探针，探针的部分或全部序列能够与待检测的靶标DNA分子互补，且所述探针互补区域内部嵌入一个或多个RNA碱基，所述RNA碱基将探针互补区域分隔为至少两个区段，每个区段中DNA碱基和不妨碍核酸链杂交的碱基替代物的总个数独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个。

本发明还涉及试剂盒，其包含如上所述的组合产品。

本发明还涉及如上所述的组合产品在检测SNP中的应用；其中所述探针中所述RNA碱基为一个。

本发明还涉及如上所述的组合产品在检测靶DNA中的应用，所述靶DNA由LAMP、NEAR或RPA引物扩增得到。

本发明的有益效果为：

(1)在同样的互补链浓度下，提高被切断探针的占比，增强信号；

(2)使探针切断后的产物片段更短(≤13个碱基)，更容易从互补链上解离，避免切割产物作为引物进行延伸导致互补链被封闭，以便互补链结合新的探针，从而提升系统灵敏度。

(3)体系的兼容性好，可以搭配LAMP、NEAR、RPA等多种恒温扩增方法使用，并可在反应前在扩增体系中加入报告系统，不需要增加额外操作与反应，就可以在扩增过程实现结果报告。

(4)结合LAMP、NEAR、RPA等恒温扩增方法使用时，和其他等温扩增常用的荧光染料、颜色指示剂比较，探针对扩增产物识别能确保检测结果的特异性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明一个实施例中探针Tm值对检测效果影响的结果图，其中A表示60℃反应的结果，B表示65℃反应的结果；

图2为本发明一个实施例中DNA碱基区段长度对切割效果影响的结果图，其中A列表示体系不存在聚合酶的结果，B列表示体系存在聚合酶的结果；

图3为本发明一个实施例中DNA碱基区段长度对可报告温度范围的影响结果图；

图4为本发明一个实施例中实时荧光检测SARS-CoV-2的检测结果图，其中A表示RNase HII报告体系的检测结果，B表示染料法的检测结果；