[发明专利]一种与山羊生长性状相关的NFAT5基因分子标记及其应用

权利要求书

1.一种与山羊生长性状相关的NFAT5基因分子标记，其特征在于：所述的分子标记位于山羊NFAT5基因5’侧翼序列中，所述分子标记的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，该序列长度为392bp，在该序列中第222bp处存在一处CG碱基突变。

2.如权利要求1所述的分子标记，其特征在于：所述序列中第222bp处的C或G的碱基多态性位点，表现为CC、CG或GG三种基因型，其中C为优势等位基因。

3.权利要求1-2任一所述的分子标记在山羊生长性状标记辅助选择中的应用。

4.一种与山羊生长性状相关联的NFAT5基因SNP的检测试剂盒，其特征在于，包括：

用于扩增包含c.-454CG位点的SEQ ID NO.1所示序列的引物对：上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

以及一个用于检测c.-454CG位点的SNaPshot单碱基延伸引物如SEQ ID NO.4所示。

5.一种使用权利要求4所述检测试剂盒检测与山羊生长性状相关联的NFAT5基因SNP的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、以从待测山羊血液样本中提取的基因组DNA作为模板，合成选自所述SEQ IDNO.2～3所示PCR引物对进行PCR扩增，并对PCR产物进行纯化处理；

步骤2、以所述纯化的PCR产物为模板，通过选自所述SEQ ID NO.4所示SNaPshot单碱基延伸引物构建SNaPshot反应体系进行单碱基延伸反应，并对反应制备的单碱基延伸产物进行纯化处理；

步骤3、使用遗传学分析仪检测所述纯化后的单碱基延伸产物，并使用基因分析软件对结果进行分析。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤1中PCR扩增体系还包括PCR Mix；所述PCR扩增条件为：95℃预变性3min；95℃变性20s，60℃退火20s，72℃延伸15s，38个循环；72℃延伸5min。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤2中所述纯化的PCR产物为经SAP和ExoI酶处理后PCR产物；SNaPshot反应体系还包括Reaction Mix试剂；PCR扩增条件为96℃变性10s，50℃退火5s，60℃延伸30s，25个循环。

8.权利要求4所述的检测试剂盒在山羊生长性状标记辅助选择中的应用。