[发明专利]一种利用微生物发酵制备一清颗粒的方法

权利要求书

1.一种利用微生物发酵制备一清颗粒的方法，其特征在于，包括步骤如下：

1）分别取干燥的黄连根、黄芩根及大黄根，用粉碎机粉碎，粉碎后过80目筛，称取粉碎后的黄连、黄芩及大黄，三者的质量比为33:50:100w:w，按1:1w:v的料液比加水，121℃高压灭菌15min，得到中草药混合物；

2）取黑曲霉、酵母菌、嗜酸乳杆菌分别进行活化，然后接种于步骤1）中灭菌后的中草药混合物中进行两步发酵，第一步发酵为将黑曲霉接种于中草药混合物后的需氧发酵，发酵6d，发酵温度28℃，发酵pH 4.5，第二步为酵母菌、嗜酸乳杆菌接种中草药混合物后的厌氧发酵，发酵6d，发酵温度36℃，发酵pH 5.5；

3）向步骤2）的中草药发酵物再加水煎煮两次，第一次1.5小时，第二次1小时，煎液滤过，滤液减压浓缩至70℃下相对密度为1.25，喷雾干燥成干浸膏粉，制成颗粒，干燥，得到一清颗粒；

其中，步骤2）中，黑曲霉接种量为2%，酵母菌接种量为3%，嗜酸乳杆菌接种量为2%v/v；

a）活化黑曲霉采用两步活化法：

第一步活化用的培养基每100mL中包括如下含量的组分：马铃薯16g，葡萄糖1.5g，pH4.5，150℃高压灭菌0.4s，在30℃下培养进行需氧活化，活化时间为12h；

第二步活化用的培养基每100mL中包括如下含量的组分：玉米芯0.8g，蛋白胨0.08g，尿素0.02g，(NH₄)₂SO₄ 0.1g，KH₂PO₄ 0.2g，CaCl₂ 0.02g，MgSO₄ 0.02g，FeSO₄ 0.0003g，MnSO₄0.0001g，ZnSO₄ 0.0001g，COCl₂ 0.0002g，pH 4.5，150℃高压灭菌0.4s，30℃下培养进行需氧活化，活化时间为12h；

b）活化酵母菌用的培养基每100mL中包括如下含量的组分：

酵母浸膏1.0g，蛋白胨1.8g，葡萄糖1.7g，食米粉2.0g，腺嘌呤硫酸盐0.002g，150℃高压灭菌0.4s，25℃下培养进行厌氧活化，活化时间为20h；

c）活化嗜酸乳杆菌用的培养基每100mL中包括如下含量的组分：

乳糖0.1g，蔗糖1.5g，低聚糖0.1g，酪蛋白胨0.5g，牛肉蛋白胨0.3g，水解大豆蛋白1.0g，酵母粉0.5g，乙酸钠0.3g，柠檬酸三铵0.1g，吐温-80 0.05g，MgSO₄ 0.02g，MnSO₄0.02g，KH₂PO₄ 0.02g，CaCO₄ 0.1g，维生素B12 0.01g，对氨基苯甲酸0.03mg，叶酸0.03mg，尼克酸0.1mg，泛酸钙0.1mg，生物素0.05mg，吡哆醇0.1mg，核黄素0.1mg，pH为5.5，150℃高压灭菌0.4s，35℃下厌氧培养进行活化，活化10h。