[发明专利]双氢克尿噻半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种双氢克尿噻半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。本发明通过制备多种双氢克尿噻半抗原，偶联载体蛋白进一步得到了人工抗原，分离纯化得到了双氢克尿噻抗体，通过筛选多种结构的免疫人工抗原和包被人工抗原，最终得到最佳的抗体和包被人工抗原的组合。该抗体对双氢克尿噻具有高灵敏度和高特异性的识别能力，半抑制浓度为12.27ng/mL，为建立特异性双氢克尿噻的免疫检测方法提供了核心原材料。在这个基础上，利用该抗体建立了检测保健食品中非法添加双氢克尿噻的酶联免疫试剂盒和胶体金试纸条，具有检测时间短、操作简单、灵敏度高、准确度高等特点，实现了特异性检测保健食品中非法添加的双氢克尿噻。

技术领域

本发明涉及抗原抗体检测技术领域，更具体地，涉及双氢克尿噻半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用。

背景技术

双氢克尿噻(Hydrochlorothiazide，HCT)又名双氢氯噻嗪，双氢氯散疾，双氢氯消疾，具有中效利尿作用和降压作用，作用于水肿性疾病，它能够排泄体内过多的钠和水，减少细胞外容量，起到消除水肿的作用，可以用于治疗高血压和中枢性的、肾性的尿崩症以及肾结石。

据统计，全球成年高血压患者的数量从1975年的5亿9400万增加到了2015年的11亿3000 万。从1979年到2016年，全球肥胖成年妇女人数从6千9百万人增加到3亿9千万人，肥胖男性从3千1百万增加到2亿8千1百万。在这个大背景下，社会对于辅助减肥和降血压保健食品的需求量大大增加。一些非法分子为了牟取暴利，在降压类保健食品或减肥保健食品中非法加入 HCT从而达到迅速降血压的效果或短时间内降低体重的效果。在不知情的情况下服用非法添加HCT的保健食品，可能导致高尿酸血症，引起心血管系统、内分泌系统的不良反应；老年患者服用本类药物更易发生低血压、电解质紊乱和肾功能损害。因此，对保健食品中的HCT 进行监控检测就显得十分必要。

目前我国保健食品中HCT含量的检测方法主要有液相色谱-串联质谱法、高效液相色谱法、电化学传感器、毛细管电泳法、红外光谱法等。这些检测方法仪器昂贵，便携性差，样本前处理复杂，并且需要专业技术人员进行操作，不能达到现代化检测对快速、准确的要求。免疫分析检测方法通过抗原和抗体特异性结合的原理，根据显色就可以检测目标物，检测方法快速、灵敏、准确、成本低且操作简便，弥补了仪器分析方法的缺陷并且检测灵敏度能达到要求。

建立免疫分析方法的关键是能够制造出对小分子化合物具有高亲和力和高特异性的抗体。由于小分子化合物是半抗原，不具有免疫原性，无法直接诱导机体产生特异性抗体，只有通过适当的化学修饰，在半抗原分子结构的某个位置上带上端部为活性基团的连接臂，再与大分子载体偶联成为人工抗原，才能诱导机体产生免疫应答，产生特异性抗体。因此设计免疫半抗原分子，开发一种简单、快捷、用于检测HCT的方法显得尤为重要。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的首要目的是提供一种双氢克尿噻半抗原。

本发明的第二个目的是提供上述双氢克尿噻人工抗原。

本发明的第三个目的是提供双氢克尿噻抗体。

本发明的第四个目的是提供双氢克尿噻半抗原的制备方法。

本发明的第五个目的是提供双氢克尿噻半抗原的应用。

本发明的第六个目的是提供检测双氢克尿噻的ELISA和胶体金免疫层析试剂盒。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种双氢克尿噻半抗原，所述双氢克尿噻半抗原的结构式如式(I)所示，或者如式(II)所示，或者如式(III)所示，或者如式(IV)所示。