[发明专利]双氢克尿噻半抗原、人工抗原、抗体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种双氢克尿噻半抗原，其特征在于，所述双氢克尿噻半抗原的结构式如式(I)所示，或者如式(II)所示，或者如式(III)所示，或者如式(IV)所示。

2.权利要求1所述双氢克尿噻半抗原的制备方法，其特征在于，当制备式(I)所述半抗原时，包括以下步骤：

将双氢克尿噻溶于无水乙腈中，以K₂CO₃作为催化剂，再加入4-(2-溴乙基)苯甲酸于40～80℃回流反应后，除去溶剂，萃取反应液，收集有机相，水相再用乙酸乙酯萃取，收集有机相，合并反应液和水相中萃取所得到的有机相，干燥、过滤、纯化后即得式(I)的半抗原；

当制备式(II)所述半抗原时，包括以下步骤：

将双氢克尿噻溶于无水乙腈中，以K₂CO₃作为催化剂，再加入溴乙酸于40～80℃回流反应后，除去溶剂，萃取反应液，收集有机相，水相再用乙酸乙酯萃取，收集有机相，合并反应液和水相中萃取所得到的有机相，干燥、过滤、纯化后即得式(I)的半抗原；

当制备式(III)所述半抗原时，包括以下步骤：

将双氢克尿噻溶于无水乙腈中，以K₂CO₃作为催化剂，再加入6-溴己酸于60～80℃回流反应后，除去溶剂，萃取反应液，收集有机相，水相再用乙酸乙酯萃取，收集有机相，合并反应液和水相中萃取所得到的有机相，干燥、过滤、纯化后即得式(III)的半抗原；

当制备式(IV)所述半抗原时，包括以下步骤：

将双氢克尿噻溶于无水乙腈中，以K₂CO₃作为催化剂，再加入2-溴丙酸于40～80℃回流反应后，除去溶剂，萃取反应液，收集有机相，水相再用乙酸乙酯萃取，收集有机相，合并反应液和水相中萃取所得到的有机相，干燥、过滤、纯化后即得式(IV)的半抗原。

3.一种双氢克尿噻人工抗原，其特征在于，由权利要求1所述半抗原和载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清蛋白或者鸡卵清白蛋白。

4.权利要求3所述人工抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将式(I)，式(II)，式(III)，或式(IV)所示半抗原分别溶于无水DMF中，加入NHS和EDC，4℃下搅拌4～6h，记为A液；

S2、将载体蛋白溶于碳酸盐缓冲溶液中，记为B液，将A液逐滴加入到B液中，4℃下反应6～12h；

S3、4℃透析完成后，即得双氢克尿噻人工抗原。

5.根据权利要求4所述人工抗原的制备方法，其特征在于，S1所述双氢克尿噻人工抗原、NHS和EDC的投料比为1∶1～2∶1～2；所述载体蛋白和半抗原的摩尔比为1∶60～80。

6.权利要求5所述双氢克尿噻人工抗原的应用，其特征在于，以双氢克尿噻人工抗原作为免疫原制备双氢克尿噻抗体，或者以双氢克尿噻人工抗原作为包被原；所述抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体，或者基因工程抗体。

7.一种双氢克尿噻抗体，其特征在于，由权利要求3所述双氢克尿噻人工抗原制备得到。

8.权利要求7所述双氢克尿噻抗体在检测双氢克尿噻中的应用。

9.用于检测双氢克尿噻的ELISA和胶体金免疫层析试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述双氢克尿噻半抗原、权利要求3所述双氢克尿噻抗原、或者权利要求7所述双氢克尿噻抗体。