[发明专利]一种蔗糖磷酸化酶在制备甘油葡萄糖苷中的应用

权利要求书

1.一种蔗糖磷酸化酶在制备2-O-α-D-甘油葡萄糖苷中的应用，其特征在于所述蔗糖磷酸化酶氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述蔗糖磷酸化酶编码基因核苷酸序列为SEQID NO.1所示。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述应用的方法为：以含蔗糖磷酸化酶基因的工程菌经发酵培养获得的发酵液作为催化剂，以蔗糖作为糖基供体，以丙三醇作为糖基化受体，以pH为4.0-9.0的缓冲液为反应介质构成反应体系，在25-55℃、磁力搅拌条件下反应，反应完全后，获得含2-O-α-D-甘油葡萄糖苷的反应液，经分离纯化得到2-O-α-D-甘油葡萄糖苷。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述反应体系中，湿菌体含量为5-50g/L，蔗糖的终浓度为200-500g/L，丙三醇终浓度为20-300g/L。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述缓冲液为pH8.0，50mM甘氨酸-氢氧化钠缓冲液。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述反应条件为35-45℃，磁力搅拌，反应过程控制pH7.0-8.5之间，反应30-40h。

7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述发酵液按如下方法制备：(1)将含蔗糖磷酸化酶基因的工程菌接种在含50mg/L卡那霉素的种子培养基中，30-37℃，100-250rpm培养至对数生长中期，获得种子液，所述种子培养基终浓度组成：蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、NaCl 10g/L，溶剂为去离子水，pH为6.8-7.0；

(2)摇瓶发酵培养：将种子液以体积5％的接种量接种到含卡那霉素50mg/L的TB培养基中，30-37℃、100-250rpm培养8-20h获得发酵液；所述TB培养基终浓度组成：酵母粉24g/L，蛋白胨12g/L，甘油4mL/L，KH₂PO₄ 2.3g/L，K₂HPO₄ 12.5g/L，溶剂为去离子水，pH6.8-7.0。

8.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述发酵液的发酵罐制备方法为：将新鲜种子液按体积浓度5％的接种量接种到含体积浓度0.05％消泡剂和50mg/L卡那霉素的发酵培养基中，发酵温度37℃，溶解氧DO控制大于20％，用25％的氨水控制发酵pH6.8；从接种发酵罐开始添加补料培养基进行补料：在最初8个小时内，其补料速率从0ml/h/L起始发酵培养基匀速增加至60ml/h/L起始发酵培养基，发酵8小时后，将补料速率降至30ml/h/L起始发酵培养基，继续培养20h，获得发酵液；补料培养基为质量浓度20％葡萄糖水溶液；发酵培养基终浓度组成：酵母粉50g/L、蛋白胨30g/L、KH₂PO₄ 6g/L、葡萄糖10g/L、柠檬酸钠1g/L，溶剂为去离子水，pH6.8-7.0。

9.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述含蔗糖磷酸化酶基因的工程菌是将SEQID NO.1所示的蔗糖磷酸化酶基因克隆至枯草芽孢杆菌宿主细胞中获得的。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于所述枯草芽孢杆菌宿主为枯草芽孢杆菌(B.subtilis)WB800。