[发明专利]一种高密度酵母发酵液的制备方法

权利要求书

1.一种高密度酵母发酵液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

①、稀复合营养液和浓缩复合营养液的制备：

将玉米、豆粕粉碎，加水调浆后，依次加入高温淀粉酶、糖化酶、蛋白酶，控温酶解，彻底酶解后制得液体酶解液；将液体酶解液固液分离制得固形物湿渣和稀复合营养液；

将一部分稀复合营养液留作发酵底糖使用，剩余稀复合营养液经过减压蒸发浓缩后制得浓缩复合营养液；

其中，玉米和豆粕的质量比为1:0.01～0.2；加水调浆干物浓度为10～40%；高温淀粉酶的添加量为每吨玉米豆粕混合物加0.1～1kg，控制浆液pH 5.5～6.5，酶解时间0.5～2h；

糖化酶的添加量为每吨玉米豆粕混合物加0.1～0.5kg，控制浆液pH 4.5～5.5酶解时间0.5～20h；

蛋白酶的添加量为每吨玉米豆粕混合物加0.1～1kg，控制浆液pH 4.5～5.5，酶解时间0.5～20h；

稀复合营养液浓缩后的干物浓度为40～65%；

②、高密度酵母菌液的制备：

在全自动发酵罐中，将一部分稀复合营养液稀释后经高温灭菌冷却后，接入酵母菌种子液，所述的酵母菌种子液为酿酒酵母，通入足量的无菌空气进行培养，控制溶氧不低于20%，当溶氧突然升至60％以上时，通过蠕动泵流加无菌浓缩复合营养液和磷酸氢二铵溶液控制充足的溶氧，浓缩复合营养液和磷酸氢二铵的流加质量比1:0.004，控制pH 4.0～4.5，当酵母密度为最大时，停止流加，待溶氧回升至70％，停止通风和搅拌；

发酵罐保持正压，将酵母发酵液静置，完全沉降后，从罐底将沉淀的酵母放出，即获得高密度的酵母菌液；将发酵罐中剩余的发酵液，继续通过分别流加浓缩复合营养液和磷酸氢二铵溶液的方式控制充足的溶解氧，待酵母再次富集培养至最大密度后，停止流加，待溶氧回升至70％，停止通风和搅拌；静置，放出高密度酵母菌液，如此连续循环生产多次，收集所有高密度酵母菌液即可；

其中，控制充足的溶氧方式为：控制溶氧20％～40％，搅拌转速提高至150r/min；

其中，稀复合营养液稀释至干物浓度为0.01～5%；磷酸氢二铵溶液中磷酸氢二铵和水的质量比为10～50：50～90；浓缩复合营养液和磷酸氢二铵溶液的流加质量比为1:0.001～0.1；酵母菌种子液的接种质量比为0.2～20%；

制备酵母发酵液时：发酵温度：20～40 ℃；发酵pH ：4.0～6.0；有氧发酵搅拌转速20～1000r/min；通气比1:0.5～3v/v；溶解氧浓度为10～100%；发酵周期：12～72h，酵母发酵终点菌数为0.5～1.20×10⁹ cfu/ml；

酵母培养结束标志为：发酵液中发酵性糖含量为0～0.1%，溶解氧含量为60～100%；静置沉降时间为1～20h。

2.根据权利要求1所述的一种高密度酵母发酵液的制备方法，其特征在于：所述的酵母菌种子液为酿酒酵母CICC32280。

3.根据权利要求1所述的一种高密度酵母发酵液的制备方法，其特征在于，步骤①中反应条件如下：

玉米和豆粕的质量比为1:0.05～0.1；加水调浆干物浓度为25～30%；高温淀粉酶的添加量为每吨玉米豆粕混合物加0.3～0.5kg，控制浆液pH 5.8～6.2，酶解时间0.5～1h；

糖化酶的添加量为每吨玉米豆粕混合物加0.4～0.5kg控制浆液pH 4.8～5.2酶解时间5～10h；

蛋白酶的添加量为每吨玉米豆粕混合物加0.5～0.6kg控制浆液pH 4.5～5.5，酶解时间15～20h；

稀复合营养液浓缩后的干物浓度为40～45%。