[发明专利]一种利用可溶性淀粉制备海藻糖浆的菌株及其应用

权利要求书

1.一种利用可溶性淀粉制备海藻糖浆的菌株HKS-D-3，分类命名为芽孢杆菌（Bacillussp），保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.13052，保藏日期：2016年9月28日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

2.权利要求1所述的菌株HKS-D-3利用可溶性淀粉制备海藻糖浆的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）配制10%可溶性淀粉：将可溶性淀粉10g加入pH5.5-6.5磷酸缓冲液，沸水浴中，边搅拌边加热溶解至溶液呈透明状，冷却至室温，补充pH5.5-6.5磷酸缓冲液至100mL；

（2）制备粗酶液：将芽孢杆菌（Bacillus sp）HKS-D-3，以重量比0.3%接种于发酵培养基中，37℃、180r/min摇床震荡培养48h，4℃、6000r/min离心10～15min，弃去上清液，将获得的菌体泥用pH5.5-6.5磷酸缓冲液震荡洗涤2-3次，收集菌体沉淀，加入与发酵培养基等重量的pH5.5-6.5磷酸缓冲液，震荡使其悬浮，在冰浴中用超声波破壁处理，300W超声5s，间隔5s，再进行 下一次超声，总超声时间13min，于4℃、12000r/min离心10min，收集上清液，即为粗酶液；

所述发酵培养基是由重量计：可溶性淀粉20.0g，蛋白胨5.0g，牛肉膏2.0g，K₂HPO₄1.0g，NaH₂PO₄ 1.0g和MgSO₄·7H₂O 1.0g加蒸馏水至1.0L混匀，用盐酸或氢氧化钠调pH7.0，121℃灭菌20min制成；所述pH5.5-6.5磷酸缓冲液：取磷酸二氢钾0.68g，加入0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1ml，用水稀释成100mL，用盐酸或氢氧化钠调节至pH5.5-6.5即得；

（3）制备海藻糖混合液：粗酶液、普鲁兰酶加入至可溶性淀粉质量含量10%的淀粉溶液中，普鲁兰酶是一种脱支酶，对可溶性淀粉进行脱支处理，在55℃、100r/min条件下震荡反应50h，使支链淀粉成为直链淀粉，得海藻糖混合液；其中每1g可溶性淀粉加粗酶液5-10mL、普鲁兰酶2-5U；

（4）后处理：海藻糖混合液经真空，在85Kpa、80℃下浓缩至海藻糖含量不小于10g/100mL的液体海藻糖浆，即为成品。

3.根据权利要求2所述的菌株HKS-D-3利用可溶性淀粉制备海藻糖浆的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）配制10%可溶性淀粉：将可溶性淀粉10g加入pH6.0磷酸缓冲液，沸水浴中，边搅拌边加热溶解至溶液呈透明状，冷却至室温，补充pH6.0磷酸缓冲液至100mL；

（2）制备粗酶液：将芽孢杆菌（Bacillus sp）HKS-D-3，以重量比0.3%接种于发酵培养基中，37℃、180r/min摇床震荡培养48h，4℃、6000r/min离心12min，弃去上清液，将获得的菌体泥用pH6.0磷酸缓冲液震荡洗涤3次，收集菌体沉淀，加入与发酵培养基等重量的pH6.0磷酸缓冲液，震荡使其悬浮，在冰浴中用超声波破壁处理，300W超声5s，间隔5s，再进行 下一次超声，总超声时间13min，于4℃、12000r/min离心10min，收集上清液，即为粗酶液；

（3）制备海藻糖混合液：粗酶液、普鲁兰酶加入至可溶性淀粉质量含量10%的淀粉溶液中，在55℃、100r/min条件下震荡反应50h，即为海藻糖混合液；其中每1g可溶性淀粉加粗酶液8mL、普鲁兰酶3U；

（4）后处理：海藻糖混合液经真空，在85Kpa、80℃下浓缩至海藻糖含量不小于10g/100mL的液体海藻糖浆，即为成品。

4.根据权利要求2所述的菌株HKS-D-3利用可溶性淀粉制备海藻糖浆的方法，其特征在于，所述的每1g可溶性淀粉加粗酶液6mL、普鲁兰酶2U。