[发明专利]一种基于SERS检测赭曲霉毒素A的方法

说明书

本发明公开了一种基于SERS检测赭曲霉毒素A的方法。其包括将sDNA固定在AuNanostar@4‑MBA@Au核壳纳米金星表面作为SERS捕获探针的制备，并将发夹DNA固定在磁珠表面。利用OTA和OTA适配体的高亲和力，以及Exo III循环放大作用，使得大量的AuNanostar@4‑MBA@Au核壳纳米金星SERS捕获探针连接至磁珠表面。从而检测得到的SERS的强度与OTA的浓度有着密切关系，即开发了“开启”模式的SERS适配体传感器用于超敏感OTA检测。本发明提供的检测方法对赭曲霉毒素的检测具有成本低廉，增强型，检测灵敏度高，检测线低，抗干扰性好的特点。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种基于SERS检测赭曲霉毒素A的方法，应用于毒素检测领域。

背景技术

赭曲霉毒素A（OTA）是一种真菌毒素，作为曲霉菌和青霉菌等丝状真菌的次级代谢产物，作为食品危害物质引起了越来越多的关注。OTA常见于谷物和其他食品储存过程中，因为它们具有致癌，致畸，致突变和免疫抑制特性，所以过量摄入OTA可能会导致急性或慢性疾病发作甚至死亡。因此，迫切需要开发一种简单，灵敏的方法来测定受污食品中的OTA。

近年来，OTA检测技术发展迅速，包括高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)、HPLC-MS/MS、荧光、电化学、表面增强拉曼光谱法（SERS）等，其中SERS方法由于检测灵敏度高，得到了广泛的应用。但是，大部分SERS传感器用于检测OTA都是“关闭”模式，检测过程可能存在假阳性反应。因此，有必要研制一种用于OTA超灵敏检测的“开启”模式SERS传感器。

在此，基于AuNS@4-MBA@Au SERS探针与Exo III辅助循环扩增相结合，构建了一种新型的“开启”模式SERS适配体传感器用于超灵敏OTA检测。在OTA存在下，从dsDNA（OTA-适体/cDNA）释放cDNA。释放的cDNA可以与磁珠表面的发夹DNA杂交形成dsDNA，其被Exo III消化释放cDNA，释放的cDNA可以进一步与发夹DNA杂交以实现循环扩增，导致在磁珠表面留下大量短ssDNA。磁珠表面留下大量短ssDNA可以与AuNS@4-MBA@Au表面的sDNA一起孵育形成磁珠/dsDNA/AuNanostar@4-MBA@Au组件，从而在磁珠表面产生强烈的SERS信号。开发的SERS适配体传感器为食品检测提供了一种很有前景的工具。

发明内容

本发明目的在于提供一种基于SERS检测赭曲霉毒素A的方法。本发明的传感器结构简单、灵敏度高、选择性好，为食品安全方面提供了一种高灵敏、低成本检测赭曲霉毒素A的方法。

为了实现本发明目的，本发明利用OTA适配体的特殊碱基对能够与OTA特异性结合，再利用Exo III的辅助循环扩增作用，以及AuNanostar@4-MBA@Au高灵敏高稳定的SERS信号强度，实现对赭曲霉毒素A进行高灵敏分析检测。具体方法包括以下步骤：在OTA存在下，由于OTA和OTA适配体的更高亲和力，cDNA将从dsDNA（5uL, 2uM OTA-适配体和5uL, 2uMcDNA杂交形成）释放出来；释放的cDNA与磁珠/发夹DNA一起孵育形成dsDNA，在Exo III作用下该dsDNA中发夹DNA的3'末端将被剪切，导致cDNA释放，并进一步与发夹DNA杂交以实现循环扩增，导致在磁珠表面留下大量短的ssDNA，制得磁珠/ssDNA；磁珠/ssDNA与AuNanostar@4-MBA@Au/sDNA孵育形成磁/dsDNA/AuNanostar@4-MBA@Au组件；最后，取磁珠/dsDNA/AuNanostar@4-MBA@Au组件溶液滴在硅片上，烘干即可检测其SERS信号。

一种AuNanostar@4-MBA@Au/sDNA SERS捕获探针的制备方法，包括以下步骤：