[发明专利]4-氨基丁酸氨基转移酶在提高伊枯草菌素A发酵产量中的应用

权利要求书

1.4-氨基丁酸氨基转移酶在提高解淀粉芽胞杆菌发酵生产伊枯草菌素A的产量中的应用；

(1)以解淀粉芽胞杆菌LX-12的基因组DNA为模板，PCR扩增出gabT基因的上游同源臂和gabT基因的下游同源臂；

上游同源臂引物T-F1和T-R1：

T-F1；GCTCTAGAAATAGCGGTGAGGATAATCGTGC

T-R1：CTCACTTGATTTCCTCCAATAGCTTCCTTCGTTCCCACAAATACC；

下游同源臂引物T-F2和T-R2：

T-F2：GGTATTTGTGGGAACGAAGGAAGCTATTGGAGGAAATCAAGTGAG

T-R2：CGAGCTCTTGAAAACAAAAACCCCGCCA；

(2)通过重叠延伸PCR将gabT基因的上游同源臂和gabT基因的下游同源臂连接到一起，构成目的基因片段，该目的基因片段的排列顺序为：gabT基因的上游同源臂-gabT基因的下游同源臂；

(3)采用SacI和XbaI限制性内切酶对目的基因片段进行双酶切得到酶切基因片段，同时，采用SacI和XbaI限制性内切酶对质粒T2(2)-ori进行双酶切得到线性质粒片段；

(4)将步骤(2)得到的酶切目的片段和步骤(3)得到的线性质粒片段经T4-DNA连接酶进行连接，得到敲除质粒T2(2)-△gabT；

(5)将敲除质粒T2(2)-△gabT转入解淀粉芽胞杆菌LX-12中，筛选即得缺失了gabT基因的解淀粉芽胞杆菌LX-12△gabT；

所述的解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)为解淀粉芽胞杆菌LX-12，保藏编号为CCTCC NO：M2015234；

所述的4-氨基丁酸氨基转移酶的基因为SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，在应用过程中使用的发酵培养基配方，包括豆粕50-90g/L，玉米淀粉30-70g/L，KH₂PO₄ 1.0-2.0g/L，MgSO₄·7H₂O 0.50-1.0g/L、FeSO₄·7H₂O0.10-0.30g/L、MnSO₄·H₂O 0.01-0.05g/L，pH6.2～7.2。