[发明专利]一种乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测乙型肝炎病毒DNA的数字PCR反应预混物，其特征在于，所述数字PCR反应预混物包括正向引物、反向引物和探针，其中，

所述正向引物为：SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2所示的引物，

所述反向引物为：SEQ ID NO. 3所示的引物，

所述探针为：SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 5所示的探针。

2.根据权利要求1所述的数字PCR反应预混物，其还包括选自以下的一种或多种组分：热启动Taq酶、UDG酶、dNTPs和Mg²⁺离子。

3. 根据权利要求1所述的数字PCR反应预混物，其还包括一组用于扩增外参质控品的引物，其中，所述引物为：SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 7所示的引物。

4. 根据权利要求1所述的反应预混物，其还包括用于检测外参质控品的探针，其中，所述探针为：SEQ ID NO. 8所示的探针。

5.一种用于检测乙型肝炎病毒DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括数字PCR反应预混物，所述数字PCR反应预混物包括正向引物和反向引物，其中，

所述正向引物为：SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2所示的引物，

所述反向引物为：SEQ ID NO. 3所示的引物；

所述数字PCR反应预混物还包括探针，其中，所述探针为：SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO.5所示的探针。

6. 根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述数字PCR反应预混物还包括一组用于扩增外参质控品的引物，其中，所述引物为：SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 7所示的引物。

7. 根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述数字PCR反应预混物还包括用于检测外参质控品的探针，其中，所述探针为：SEQ ID NO. 8所示的探针。

8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述数字PCR反应预混物还包括选自以下的一种或多种组分：热启动Taq酶、UDG酶、dNTPs和Mg²⁺离子。

9.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括HBV阴性质控品、HBV强阳性质控品、HBV弱阳性质控品；和/或外参质控品。

10.一种检测乙型肝炎病毒DNA的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(1) 提供待检测样本，所述样本中含有乙型肝炎病毒DNA；

(2) 制备数字PCR反应体系，进行dPCR反应，摄取数字PCR终反应的图像，通过图像分析统计乙型肝炎病毒DNA阴性和阳性液滴的数量，利用泊松分布计算所述数字PCR反应体系中乙型肝炎病毒DNA的拷贝数，进而计算起始待检测样本中乙型肝炎病毒DNA的浓度；

其中，所述数字PCR反应体系包括步骤(1)提供的待检测样本和权利要求1所述的数字PCR反应预混物。