[发明专利]一种试剂盒、方法、引物对和探针及其应用

权利要求书

1.一种鉴别蛋白类生化原料粗品中动物源性成分的试剂盒，其包括实时荧光PCR反应体系，其特征在于，所述实时荧光PCR反应体系包括以下至少一种引物对及MGB探针，

所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述MGB探针包括序列如SEQ ID NO.3所示的核酸、荧光基团和非荧光淬灭基团；

和，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，所述MGB探针包括序列如SEQ ID NO.6所示的核酸、荧光基团和非荧光淬灭基团；

和，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，所述MGB探针包括序列如SEQ ID NO.9所示的核酸、荧光基团和非荧光淬灭基团。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光基团为5-羧基荧光素。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述实时荧光PCR反应体系还包括PCR反应缓冲液、2’-脱氧核苷三磷酸和Taq酶；较佳地：

所述实时荧光PCR反应体系中Mg²⁺的浓度为2mM；

和/或，所述2’-脱氧核苷三磷酸的浓度均为0.2mM；

和/或，所述Taq酶的活力单位为0.025U/μl；

和/或，所述引物对的浓度分别为10μmol/L；

和/或，所述探针的浓度为10μmol/L。

4.如权利要求1～3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述动物为偶蹄目动物；较佳地，所述偶蹄目动物包括猪、牛和/或羊。

5.如权利要求1～4任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述蛋白类生化原料粗品为糜蛋白酶原、垂体后叶颗粒或玻璃酸酶粗品。

6.一种鉴别蛋白类生化原料粗品中动物源性成分的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

1)提取待检样品中的DNA；

2)利用如权利要求1～5任一项所述试剂盒中的实时荧光PCR反应体系扩增上述DNA；

3)分析检测结果；

较佳地，步骤1)中所述DNA为使用Ezup柱式动物基因组DNA抽提试剂盒或GMO提取试剂盒提取获得。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述实时荧光PCR反应体系扩增的反应程序为：(1)95℃预变性10s；(2)95℃变性5s；(3)70℃退火30s、采集荧光；(4)步骤(2)-(3)循环40次。

8.一种鉴别蛋白类生化原料粗品中动物源性成分的引物对和/或MGB探针，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，和/或，所述MGB探针包括序列如SEQ ID NO.3所示的核酸、荧光基团和非荧光淬灭基团；

和/或，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，和/或，所述MGB探针包括序列如SEQ ID NO.6所示的核酸、荧光基团和非荧光淬灭基团；

和/或，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，和/或，所述MGB探针包括序列如SEQ ID NO.9所示的核酸、荧光基团和非荧光淬灭基团；

较佳地，所述荧光基团为5-羧基荧光素。

9.如权利要求8所述的引物对和/或MGB探针，其特征在于，所述蛋白类生化原料粗品为糜蛋白酶原、垂体后叶颗粒或玻璃酸酶粗品；

和/或，所述动物为偶蹄目动物，优选猪、牛和/或羊。

10.如权利要求9所述的引物对和/或MGB探针在鉴别蛋白类生化原料粗品中动物源性成分的应用。